來源與構建：該細胞系以 BHK-21 細胞為親本，通過慢病毒介導將人源 HTIGAR 基因導入細胞基因組，經嘌呤霉素抗性篩選及單克隆純化獲得。HTIGAR 基因由 CMV 啟動子驅動，C 端融合 FLAG 標簽，便于蛋白檢測與純化，“HTIGAR" 標識其核心功能蛋白 —— 一種可激活磷酸果糖激酶、調控糖酵解的代謝調節(jié)因子。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型成纖維樣形態(tài)，貼壁生長時呈長梭形，排列疏松，核仁清晰，細胞間連接疏松。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 24-30 小時，適應含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，傳代 80 次以上仍保持穩(wěn)定生長速率，HTIGAR 表達量波動＜8%，凍存復蘇后存活率超 85%。

功能特征：該細胞系的核心優(yōu)勢在于 HTIGAR 的代謝調控活性：與空載 BHK 細胞相比，其糖酵解速率降低 30%-40%（乳酸生成量檢測），而磷酸戊糖途徑活性提升 25%-35%（NADPH 生成量檢測），同時細胞對氧化應激的抵抗能力增強（H?O?處理后存活率提升 2 倍），wan美模擬腫瘤細胞中 HTIGAR 介導的代謝重編程表型。

貼壁培養(yǎng)操作：

功能實驗處理：

凍存流程：取對數生長期細胞，1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（70% wan全培養(yǎng)基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 4×10?個 /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜，次日轉移至液氮保存，保存期可達 5 年以上。

優(yōu)勢：HTIGAR 表達穩(wěn)定，代謝表型均一（批間差異＜10%）；FLAG 標簽便于蛋白定位與互作研究；貼壁牢固，適合長時程代謝檢測；可直接與空載 BHK 細胞對比，排除背景干擾。

局限性：倉鼠與人類代謝通路存在細微差異，需結合人源細胞驗證；高表達 HTIGAR 可能導致細胞接觸抑制減弱，傳代時需嚴格控制密度；部分代謝檢測需專用試劑盒，實驗成本較高。