來(lái)源與構(gòu)建：該細(xì)胞系以 CHO-K1 為親本，采用同源重組技術(shù)將含 B4Z2 啟動(dòng)子、目的基因多克隆位點(diǎn)及 hygromycin 抗性基因的表達(dá)框定點(diǎn)整合至 CHO 基因組安全位點(diǎn)。名稱中 “247C-B4Z2-01-C-005" 為克隆篩選標(biāo)識(shí)，其中 “B4Z2" 代表核心調(diào)控元件 —— 一種受四環(huán)素類似物誘導(dǎo)的啟動(dòng)子，可通過(guò)添加 doxycycline 實(shí)現(xiàn)蛋白表達(dá)的時(shí)空調(diào)控。構(gòu)建過(guò)程中采用絕緣子序列優(yōu)化，使外源基因表達(dá)波動(dòng)幅度控制在 5% 以內(nèi)。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長(zhǎng)時(shí)呈多角形，排列緊密；懸浮培養(yǎng)形成直徑 20-40μm 的松散聚集體，細(xì)胞輪廓清晰，活力長(zhǎng)期維持在 92% 以上。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 30-36 小時(shí)，適應(yīng)無(wú)血清化學(xué)限定培養(yǎng)基（如 HyClone SFM4CHO），傳代 100 次以上仍保持穩(wěn)定生長(zhǎng)速率，誘導(dǎo)后目標(biāo)蛋白表達(dá)量衰減＜7%，凍存復(fù)蘇后存活率超 88%。

功能特征：該細(xì)胞系的核心優(yōu)勢(shì)在于 B4Z2 啟動(dòng)子的誘導(dǎo)調(diào)控特性：未誘導(dǎo)狀態(tài)下，目標(biāo)蛋白基礎(chǔ)表達(dá)量＜0.1μg/mL；添加 1μg/mL doxycycline 后，24 小時(shí)內(nèi)表達(dá)量快速升至 2-4g/L（流加培養(yǎng)），誘導(dǎo)倍數(shù)達(dá) 50-100 倍（ELISA 檢測(cè)），且誘導(dǎo)效率與誘導(dǎo)劑濃度呈線性相關(guān)（有效范圍 0.01-5μg/mL），可精準(zhǔn)控制蛋白合成時(shí)機(jī)，減少毒性蛋白對(duì)細(xì)胞的損傷。

貼壁培養(yǎng)操作：

懸浮誘導(dǎo)培養(yǎng)：

凍存流程：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（80% 無(wú)血清培養(yǎng)基 + 10% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 5×10?個(gè) /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過(guò)夜，次日轉(zhuǎn)移至液氮保存，保存期可達(dá) 5 年以上。

優(yōu)勢(shì)：B4Z2 啟動(dòng)子誘導(dǎo)響應(yīng)精準(zhǔn)，基礎(chǔ)表達(dá)極低（＜0.1% 誘導(dǎo)表達(dá)量）；定點(diǎn)整合確保表達(dá)穩(wěn)定性，傳代 60 次無(wú)明顯衰減；兼容貼壁與懸浮培養(yǎng)，可無(wú)縫放大至生物反應(yīng)器；產(chǎn)物糖基化修飾均一，批間差異＜5%，符合生物藥質(zhì)量要求。

局限性：誘導(dǎo)劑 doxycycline 可能殘留于產(chǎn)物中，需優(yōu)化純化工藝去除；高誘導(dǎo)強(qiáng)度下（＞5μg/mL）可能抑制細(xì)胞增殖，需控制誘導(dǎo)濃度；構(gòu)建周期長(zhǎng)（約 3 個(gè)月），初始篩選成本較高。