來源與構(gòu)建：該細胞系以 CHO-S 為親本，采用 CRISPR/Cas9 介導的定點整合技術(shù)，將含 B9Z4 啟動子、目的基因克隆位點及嘌呤霉素抗性基因的表達盒插入 CHO 基因組的 Rosa26 安全位點。名稱中 “247A-B9Z4-02-C-T9" 為克隆篩選標識，其中 “B9Z4" 代表核心調(diào)控元件 —— 一種受蛻皮激素類似物誘導的啟動子，可通過添加 ponasterone A 實現(xiàn)蛋白表達的時序調(diào)控。構(gòu)建過程中引入基質(zhì)附著區(qū)（MAR）序列，使外源基因表達波動控制在 4% 以內(nèi)，顯著優(yōu)于隨機整合株系。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈上皮樣形態(tài)，貼壁生長時呈多角形，排列緊密；懸浮培養(yǎng)形成直徑 15-35μm 的均一聚集體，細胞圓潤透亮，活力長期維持在 93% 以上。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 28-34 小時，適應多種無血清化學限定培養(yǎng)基（如 Gibco CD OptiCHO），傳代 120 次以上生長速率無明顯下降，誘導后目標蛋白表達量衰減＜6%，凍存復蘇后存活率超 90%。

功能特征：該細胞系的核心優(yōu)勢在于 B9Z4 啟動子的誘導特異性：未誘導時目標蛋白基礎表達量＜0.05μg/mL（僅為誘導狀態(tài)的 0.5%）；添加 1μM ponasterone A 后，36 小時內(nèi)表達量可達 3-6g/L（流加培養(yǎng)），誘導倍數(shù)達 100-200 倍（ELISA 檢測），且誘導效率在 0.1-10μM 范圍內(nèi)呈嚴格劑量依賴性，便于精準調(diào)控蛋白合成速率，尤其適合毒性蛋白的生產(chǎn)。

貼壁培養(yǎng)操作：

懸浮誘導培養(yǎng)：

凍存流程：取對數(shù)生長期細胞，1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（85% 無血清培養(yǎng)基 + 10% 胎牛血清 + 5% DMSO）重懸至 6×10?個 /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜，次日轉(zhuǎn)移至液氮保存，保存期可達 6 年以上。

優(yōu)勢：B9Z4 啟動子誘導背景更低（＜0.5% 誘導表達量），適合高毒性蛋白生產(chǎn)；ponasterone A 誘導劑無細胞毒性，可維持長期高表達；定點整合結(jié)合 MAR 序列，傳代 80 次表達穩(wěn)定；產(chǎn)物糖基化均一性優(yōu)異（批間差異＜4%），符合 FDA/EMA 質(zhì)量標準。

局限性：ponasterone A 成本高于四環(huán)素類誘導劑（約為 2 倍）；誘導后 24-36 小時才達表達峰值，快速響應實驗需提前規(guī)劃；對培養(yǎng)基中固醇類物質(zhì)敏感，需嚴格控制成分一致性。