來源與構建：該細胞系以 CHO-DG44 為親本（區別于 247A 的 CHO-S 背景），采用 TALEN 介導的定點整合技術，將含優化版 B9Z4 啟動子、目的基因克隆位點及 Zeocin 抗性基因的表達盒插入 CHO 基因組的 HPRT 位點。名稱中 “247B-B9Z4-01-C-T9" 標識其為 247 系列的 B 亞型克隆，核心調控元件 B9Z4 啟動子經序列修飾，增強了對 ponasterone A 的響應靈敏度，同時刪除潛在沉默子序列，使外源基因表達穩定性進一步提升。

形態與增殖：體外培養呈上皮樣形態，貼壁生長時細胞鋪展面積略大于 247A 株系，排列更疏松；懸浮培養形成直徑 10-30μm 的細密聚集體，均一度優于 247A（變異系數＜15%）。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 26-32 小時，較 247A 縮短 2-4 小時，適應無血清培養基范圍更廣（含 Ex-Cell CHO、PowerCHO 等），傳代 120 次以上生長速率衰減＜5%，誘導后蛋白表達量波動＜5%，凍存復蘇存活率超 92%。

功能特征：核心優勢在于 B9Z4 啟動子的高靈敏度與快速響應：未誘導時目標蛋白基礎表達量＜0.03μg/mL（僅為誘導狀態的 0.3%）；添加 0.5μM ponasterone A 后，24 小時內表達量達 4-7g/L（流加培養），誘導倍數提升至 200-300 倍，較 247A 提高約 50%。對誘導劑濃度響應更精準（有效范圍 0.05-5μM），便于微調蛋白表達量，尤其適合需嚴格控制劑量的功能實驗。

貼壁培養操作：

懸浮誘導培養：

凍存流程：對數期細胞離心后，用凍存液（90% 無血清培養基 + 5% 胎牛血清 + 5% DMSO）重懸至 7×10?個 /mL，凍存復蘇后活力恢復速度較 247A 快 6-8 小時，適合緊急實驗啟動。

優勢：較 247A 增殖更快，適合高密度培養；誘導響應更迅速，達峰時間縮短 12 小時；灌流培養適應性更強，代謝副產物積累少；Zeocin 抗性篩選效率更高，陽性克隆比例提升 20%。

局限性：對剪切力略敏感，反應器攪拌速率需控制在 100-130rpm（247A 可耐受 140rpm）；高濃度誘導劑（＞5μM）下表達量反而下降 5%-8%，需嚴格控制劑量；培養基成本較 247A 高 5%-10%。