來源與構建：該細胞系以 CHO-K1 為親本，通過兩步轉染法構建：首先通過慢病毒載體導入 IL-4Rα 鏈編碼基因，篩選獲得穩定表達 IL-4R 的細胞株；再通過脂質體轉染將 pGL4.23 載體（含 IL-4 響應元件驅動的熒光素酶基因）整合入基因組，經嘌呤霉素與 hygromycin 雙篩選獲得陽性克隆。“IL-4R + pGL4.23" 標識其雙重功能 —— 受體表達與報告響應，構建過程中采用 CMV 啟動子驅動 IL-4R 表達，確保受體在細胞表面的穩定呈現（流式檢測陽性率＞95%）。

形態與增殖：體外培養呈上皮樣形態，貼壁生長時細胞鋪展均勻，較野生型 CHO 略大；懸浮培養適應性較差，主要以貼壁方式培養。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 34-40 小時，適應含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養基，需同時添加兩種抗生素（2μg/mL 嘌呤霉素 + 100μg/mL hygromycin）維持雙基因穩定整合，傳代 60 次以上受體表達量與報告活性波動＜8%，凍存復蘇后存活率超 85%。

功能特征：核心優勢在于信號響應的特異性與量化能力：IL-4 刺激后，IL-4R 與 γc 鏈形成異二聚體，激活 JAK1/3-STAT6 通路，使 pGL4.23 載體中的 STAT6 結合元件驅動熒光素酶表達，酶活性與 IL-4 濃度呈劑量依賴性（有效范圍 0.1-100ng/mL，EC50=2.3ng/mL）。與天然表達 IL-4R 的細胞相比，其背景信號低（未刺激時熒光素酶活性＜5% 最大響應值），信號 - to-noise 比值達 40:1，顯著優于傳統報告系統。

貼壁培養操作：

信號響應檢測流程：

凍存流程：取對數生長期細胞，1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（70% wan全培養基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO + 雙抗生素）重懸至 5×10?個 /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜，次日轉移至液氮保存，保存期可達 5 年以上，復蘇后需培養 2-3 代再進行信號檢測以確保穩定性。

優勢：IL-4R 表達穩定，信號響應特異性強（對 IL-13 等同源細胞因子交叉反應＜5%）；pGL4.23 報告系統靈敏度高，檢測下限達 0.1ng/mL IL-4；雙抗生素篩選確保基因整合穩定性；實驗重復性優異（變異系數＜7%），適合高通量篩選。

局限性：僅反映 IL-4R/STAT6 通路，無法模擬復雜免疫微環境中的交叉調控；貼壁依賴性限制了懸浮高通量篩選；長期傳代可能出現報告載體沉默（約 5% 克隆 / 60 代），需定期通過熒光素酶活性驗證。