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詳細介紹
來源與馴化：該細胞系源自 CHO-S 親本株，經無血清培養基適應性馴化與單細胞克隆篩選獲得。通過在 125mL 搖瓶中連續傳代 60 次，逐步提高轉速（從 100rpm 增至 140rpm）并降低血清濃度（從 5% 降至 0%），最終篩選出第 4 株懸浮性能zuiyou的克隆（“S-4" 標識篩選批次與編號）。馴化過程未引入基因編輯，僅通過表型篩選實現，確保細胞遺傳背景的穩定性，全基因組測序顯示與 CHO-S 親本相似度＞99.9%。
形態與增殖：體外培養呈上皮樣形態，懸浮生長時呈圓形或短梭形，形成直徑 15-30μm 的均一聚集體（聚集體比例＜10%），顯著優于普通 CHO-S（聚集體比例 25%-30%）。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 26-30 小時，較親本縮短 4-6 小時，無血清懸浮培養密度可達 1.8×10?個 /mL（流加培養），活率長期維持在 90% 以上，傳代 150 次以上生長性能無明顯衰減，凍存復蘇后存活率超 92%。
功能特征：核心優勢在于蛋白表達與懸浮適應性的協同優化：轉染外源基因后，重組蛋白表達量達 8-12g/L（流加培養），較普通 CHO-S 提升 30%-50%，且產物均一性高（聚合體比例＜2%）。其分泌途徑更高效，內質網應激標志物 GRP78 表達量較親本降低 40%，表明蛋白折疊與分泌能力增強；同時，對剪切力耐受性顯著提升（可耐受 160rpm 攪拌速率），為生物反應器放大提供便利。
重組蛋白大規模生產
生物藥工藝開發與優化
表達系統穩定性驗證
懸浮種子培養：
復蘇：從液氮取出凍存管，37℃水浴 1 分鐘解凍，轉移至含 30mL 預熱無血清培養基（如 Gibco CD FortiCHO）的 125mL 搖瓶，120rpm、37℃、5% CO?培養，24 小時后細胞活率可恢復至 90% 以上。
傳代：當細胞密度達 4-6×10?個 /mL 時，按 1:5 比例接種至新鮮培養基，維持搖瓶工作體積為總容積的 30%（如 250mL 搖瓶接種 75mL 細胞懸液），傳代間隔 2-3 天，避免密度超過 8×10?個 /mL（可能導致活率下降）。
流加培養工藝：
接種：將種子細胞以 3×10?個 /mL 密度接種至 5L 生物反應器，初始工作體積 2L，攪拌速率 120rpm，溶解氧（DO）維持 50% 空氣飽和度。
流加策略：細胞密度達 6×10?個 /mL 時開始流加補料（含葡萄糖、氨基酸與脂類混合物），每日補加體積為初始體積的 3%-5%，維持葡萄糖濃度 3-5g/L，pH 7.0±0.2。
收獲：培養 10-14 天，當細胞活率降至 80% 以下時收獲上清，經 0.22μm 濾膜過濾后用于蛋白純化，純化回收率可達 85% 以上（Protein A 親和層析）。
凍存流程：取對數生長期細胞（密度 6-8×10?個 /mL，活率＞95%），1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（90% 無血清培養基 + 10% DMSO）重懸至 1×10?個 /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜，次日轉移至液氮保存，保存期可達 7 年以上，復蘇后無需適應即可直接懸浮培養。
優勢：懸浮生長性能優異，聚集體少且均一度高；無血清適應能力強，可直接放大至數千升反應器；重組蛋白表達量高（8-12g/L）且穩定性好；對剪切力與工藝波動耐受性強，適合工業化生產；培養周期短（10-14 天），生產效率高。
局限性：對培養基營養成分敏感，需使用高質量無血清培養基（成本較高）；高細胞密度下易積累乳酸（＞3g/L 時抑制生長），需優化流加策略；部分復雜糖蛋白（如含多天線糖型）的糖基化完整性略低于貼壁 CHO 細胞。
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