肝癌標志物表達：高表達甲胎蛋白（AFP），分泌量達 500ng/10?細胞 / 天（ELISA 檢測），且表達癌胚抗原（CEA）、異常凝xue酶原（PIVKA-II）等肝癌特異性標志物，免疫熒光陽性率均＞90%，與人類肝癌組織的標志物譜高度吻合。

惡性生物學行為：具有強增殖能力，克隆形成率達 45%（軟瓊脂集落實驗）；在 Transwell 實驗中，遷移與侵襲細胞數分別為正常恒河猴肝細胞的 8 倍和 10 倍，基質金屬蛋白酶 - 9（MMP-9）分泌量顯著升高，模擬肝癌細胞的轉移特性。

代謝特征：呈現 “瓦堡效應"，葡萄糖消耗速率為正常肝細胞的 3 倍，乳酸生成量增加 2.5 倍，同時谷an酰胺依賴增強，為肝癌代謝重編程研究提供模型。

基因突變與信號通路解析：通過全基因組測序發現，M12353 細胞存在 TP53 基因缺失與 CTNNB1（β- 連環蛋白）激活突變，導致 Wnt/β- 連環蛋白信號通路持續激活，與人類肝癌的高頻突變特征一致。利用 CRISPR-Cas9 技術修復 TP53 后，細胞增殖速率下降 60%，證實該基因突變在肝癌發生中的驅動作用。

腫瘤微環境相互作用研究：構建 M12353 細胞與肝星狀細胞共培養模型，發現星狀細胞分泌的 IL-6 可激活 STAT3 通路，促進肝癌細胞耐藥基因表達（如 ABCB1），阻斷 IL-6/STAT3 軸后，細胞對hua療藥物的敏感性提升 2 倍，為靶向腫瘤微環境的治療提供依據。

hua療藥物敏感性測試：可用于評估肝癌hua療藥物的 efficacy 與毒性。例如，在該細胞系中測試索拉非尼的 IC??=8μM，與臨床患者的藥物響應濃度一致；聯合使用雷帕霉素后，IC??降至 3μM，協同指數（CI）=0.4，證實 mTOR 抑制劑與索拉非尼的協同作用，為聯合用藥方案提供實驗支持。

靶向藥物開發：基于其高表達的 EGFR 與 VEGFR，構建靶向藥物篩選模型。篩選出的新型 EGFR 抗體偶聯藥物（ADC）對細胞的殺傷效率達 90%（EC??=0.1μM），且對正常肝細胞毒性低，動物實驗顯示其可使移植瘤體積縮小 75%，為肝癌靶向治療提供候選藥物。

靶向載體評估：可用于測試肝靶向遞送系統的效率。例如，將載藥納米顆粒修飾肝癌細胞特異性肽（針對 AFP 受體），與 M12353 細胞共孵育后，細胞內藥物濃度是未修飾顆粒的 5 倍，殺傷效率提升 3 倍，為靶向制劑優化提供數據。

基因治療驗證：作為肝癌基因治療的模型，評估 CRISPR 基因編輯系統的效果。通過脂質體遞送靶向 CTNNB1 的 sgRNA，細胞中 β- 連環蛋白表達量下降 70%，腫瘤細胞凋亡率增加 40%，為基因治療的臨床轉化提供安全性與有效性數據。

培養基：DMEM 高糖培養基添加 10% 胎牛血清、1% 谷an酰胺、1% 非必需氨基酸，pH 維持在 7.2-7.4，可加入 1% 抗生素混合液預防污染。

傳代流程：當細胞融合度達 80% 時，棄舊培養基，PBS 洗滌 2 次，加入 0.25% yi酶 - EDTA 溶液，37℃孵育 5 分鐘至細胞脫落，加入含血清的培養基終止消化，按 1:4 比例接種至新培養瓶，避免過度消化影響細胞活性。

凍存保護：取對數生長期細胞，用含 10% DMSO 的wan全培養基重懸至密度 2×10?個 /mL，程序降溫后液氮保存，復蘇時 37℃水浴快速解凍，離心去除 DMSO，傳代 2 次待細胞狀態穩定后使用。

藥物敏感性檢測：細胞以 5×103 個 / 孔接種 96 孔板，培養 24 小時后加入梯度濃度藥物，繼續培養 72 小時，通過 CCK-8 法檢測細胞活力，計算 IC??值。

侵襲實驗：Transwell 上室接種 2×10?個細胞（含 1% 血清的培養基），下室加入含 10% 血清的培養基，培養 48 小時后，固定染色并計數穿過基質膠的細胞數。

優勢：

局限性：