產(chǎn)品系統(tǒng)PRODUCT CENTER
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首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-1397Marc-145XF猴胎腎細(xì)胞系


廠家實(shí)力
Manufacturer Strength
有效保修
Valid Warranty
質(zhì)量保障
Quality Assurance產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES
詳細(xì)介紹
來源與馴化機(jī)制
形態(tài)與生長(zhǎng)特征
功能特性
病毒敏感性:對(duì) PRRSV 的感染效率達(dá) 95% 以上(流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) N 蛋白),48 小時(shí)病毒滴度達(dá) 10?.?-10?.? TCID??/mL,與貼壁細(xì)胞相當(dāng);對(duì) PRRSV 的美洲型、歐洲型及高致病性變異株均具有廣譜適應(yīng)性,滴度差異<0.3 個(gè)數(shù)量級(jí),優(yōu)于其他猴源懸浮細(xì)胞系(如 Vero-S)。
受體表達(dá):PRRSV 主要受體 CD163 的表達(dá)量達(dá) 1.1×10?分子 / 細(xì)胞(流式檢測(cè)),與貼壁 Marc-145 無顯著差異,為病毒入侵提供充足分子基礎(chǔ)。
代謝特征:葡萄糖消耗速率為 22 mg/10? cells / 天,乳酸積累速率較貼壁細(xì)胞降低 35%(僅 0.18 g/10? cells / 天),谷an酰胺利用率提升 20%,更適合高密度長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng),可延長(zhǎng)病毒復(fù)制平臺(tái)期至 72 小時(shí)。
PRRSV 疫苗規(guī)模化生產(chǎn)
滅活疫苗生產(chǎn):在 500L 攪拌式生物反應(yīng)器中,Marc-145XF 細(xì)胞密度達(dá) 3×10? cells/mL,PRRSV 病毒滴度穩(wěn)定在 10? TCID??/mL,單批次病毒產(chǎn)量達(dá) 1.5×1011 TCID??,可生產(chǎn) 1500 萬劑滅活疫苗,較傳統(tǒng)轉(zhuǎn)瓶工藝效率提升 15 倍,生產(chǎn)成本降低 50%。疫苗中宿主細(xì)胞蛋白殘留量<20ng / 劑,無血清培養(yǎng)體系避免了血清源性過敏原,使疫苗過敏反應(yīng)發(fā)生率下降 40%(臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù))。
弱毒疫苗株篩選:利用其高效病毒復(fù)制能力,可快速評(píng)估疫苗株的減毒特性與免疫原性。例如,在該細(xì)胞系中連續(xù)傳代 PRRSV 獲得的弱毒株,對(duì)仔豬的致病力下降 90%,且免疫后中和抗體效價(jià)達(dá) 1:256,保護(hù)率超 90%,為弱毒疫苗開發(fā)提供候選株。
病毒學(xué)基礎(chǔ)研究與高通量篩選
復(fù)制動(dòng)力學(xué)研究:通過懸浮培養(yǎng)的均一性,精準(zhǔn)測(cè)定 PRRSV 的復(fù)制參數(shù):潛伏期 5-6 小時(shí),對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 12-24 小時(shí),穩(wěn)定期 24-60 小時(shí),為優(yōu)化疫苗生產(chǎn)的收獲時(shí)間提供數(shù)據(jù)支撐(最佳收獲點(diǎn)為 48-54 小時(shí))。
抗病du藥物篩選:在 384 孔懸浮培養(yǎng)板中,可實(shí)現(xiàn)日均 1000 種化合物的高通量篩選。例如,篩選出的 PRRSV 3CL 蛋白酶抑制劑在該模型中 EC??=0.8μM,與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致性達(dá) 0.94,為抗 PRRSV 藥物研發(fā)提供先導(dǎo)分子。
其他病毒培養(yǎng)拓展應(yīng)用
豬圓環(huán)病毒 2 型(PCV2)共培養(yǎng):可支持 PCV2 與 PRRSV 的共感染,模擬臨床混合感染場(chǎng)景,共感染時(shí)兩種病毒滴度與單獨(dú)感染差異<10%,為研究病毒間相互作用提供模型。
病毒樣顆粒(VLP)表達(dá):作為桿狀病毒載體的宿主細(xì)胞,可高效表達(dá) PRRSV S 蛋白 VLP,產(chǎn)量達(dá) 8μg/10? cells,純度超 95%,免疫小鼠后誘導(dǎo)的中和抗體效價(jià)與滅活疫苗相當(dāng),為亞單位疫苗研發(fā)提供低成本生產(chǎn)平臺(tái)。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基:無血清 CDM 培養(yǎng)基(含 5μg/mL 重組胰島素、3μg/mL 轉(zhuǎn)鐵蛋白),添加 4mM L - 谷an酰胺,pH 維持在 7.2-7.4,需每日監(jiān)測(cè)葡萄糖濃度(維持>1.5g/L)與溶氧(30%-50%)。
傳代流程:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞懸液,1000rpm 離心 5 分鐘,棄上清后用新鮮培養(yǎng)基重懸,按初始密度 8×10? cells/mL 接種至搖瓶(轉(zhuǎn)速 110rpm)或生物反應(yīng)器,避免細(xì)胞團(tuán)過大(>150μm)導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)不均。
凍存保護(hù):取密度 3×10? cells/mL 的細(xì)胞,加入含 10% DMSO 的無血清凍存液,程序降溫后液氮保存,復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴快速解凍,直接接種至預(yù)熱培養(yǎng)基(無需離心洗滌),24 小時(shí)后細(xì)胞存活率>90%。
病毒培養(yǎng)與放大工藝
PRRSV 接種:細(xì)胞密度達(dá) 2×10? cells/mL 時(shí),按 MOI=0.001 加入病毒液,維持?jǐn)嚢杷俾?120rpm,溶氧 50%,感染后 36 小時(shí)補(bǔ)加 30% 體積的新鮮培養(yǎng)基(含 2× 谷an酰胺),48-54 小時(shí)收獲病毒液,通過 0.45μm 濾膜澄清。
生物反應(yīng)器控制:采用 pH-stat 補(bǔ)料策略,當(dāng) pH>7.3 時(shí)自動(dòng)補(bǔ)加 500g/L 葡萄糖溶液,維持代謝穩(wěn)定,可使病毒滴度提升 15%-20%。
優(yōu)勢(shì):
工業(yè)化生產(chǎn)能力:懸浮培養(yǎng)可通過生物反應(yīng)器實(shí)現(xiàn)大規(guī)模擴(kuò)增,單批次產(chǎn)量滿足千wan級(jí)疫苗需求,適合 PRRS 疫情暴發(fā)時(shí)的應(yīng)急生產(chǎn)。
安全性提升:無血清培養(yǎng)體系減少動(dòng)物源成分污染風(fēng)險(xiǎn),符合 WHO 生物制品 GMP 標(biāo)準(zhǔn),疫苗質(zhì)量更易控制。
成本效益顯著:較貼壁培養(yǎng)減少 90% 的培養(yǎng)面積,人力成本降低 60%,且病毒單位體積產(chǎn)量提升 5-8 倍。
局限性:
培養(yǎng)基成本高:無血清 CDM 培養(yǎng)基價(jià)格為傳統(tǒng)血清培養(yǎng)基的 6-8 倍,初期投入較高。
技術(shù)門檻:需掌握懸浮細(xì)胞計(jì)數(shù)、生物反應(yīng)器參數(shù)調(diào)控等技能,對(duì)操作人員要求嚴(yán)格。
病毒譜較窄:主要適用于 PRRSV 培養(yǎng),對(duì)其他病毒(如豬瘟病毒)的支持能力有限。
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