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首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-1397Marc-145XF猴胎腎細(xì)胞系

Marc-145XF猴胎腎細(xì)胞系
產(chǎn)品型號(hào):BY-1397
簡(jiǎn)要描述:

Marc-145XF猴胎腎細(xì)胞系,上皮樣,懸浮生長(zhǎng),對(duì) PRRSV 敏感性高,支持高效復(fù)制,適用于病毒大規(guī)模培養(yǎng)及疫苗工業(yè)化生產(chǎn),性能穩(wěn)定。

  • 廠家實(shí)力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質(zhì)量保障

    Quality Assurance

詳細(xì)介紹

Marc-145XF猴胎腎細(xì)胞系
Marc-145XF猴胎腎細(xì)胞系是 Marc-145 細(xì)胞經(jīng)無血清懸浮馴化獲得的衍生株,保留對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)的高度敏感性,同時(shí)具備高效懸浮生長(zhǎng)能力,是病毒大規(guī)模培養(yǎng)及疫苗工業(yè)化生產(chǎn)的核心細(xì)胞模型。其 “XF" 后綴代表 “無血清培養(yǎng)適應(yīng)性"(Xeno-Free),標(biāo)志著該細(xì)胞系在無動(dòng)物源成分條件下的穩(wěn)定生產(chǎn)性能,為生物制品的安全性與規(guī)模化生產(chǎn)提供了革新性平臺(tái)。
一、細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
  1. 來源與馴化機(jī)制

Marc-145 細(xì)胞源自非洲綠猴胎腎細(xì)胞 MA104 的克隆株,而 Marc-145XF 通過分步馴化獲得:以貼壁 Marc-145 為起始,在含化學(xué)成分限定培養(yǎng)基(CDM)中逐步降低血清濃度(從 5% 至 0),同時(shí)優(yōu)化攪拌速率(從 50rpm 提升至 120rpm),經(jīng) 40 代傳代篩選,最終獲得可在無血清懸浮環(huán)境中穩(wěn)定生長(zhǎng)的細(xì)胞群體。其馴化機(jī)制與細(xì)胞表面黏附分子(如 CD44)表達(dá)下調(diào)、細(xì)胞骨架蛋白(如 β- 肌動(dòng)蛋白)重排相關(guān),使細(xì)胞擺脫對(duì)貼壁基質(zhì)的依賴,形成直徑 50-100μm 的松散細(xì)胞團(tuán)。
  1. 形態(tài)與生長(zhǎng)特征

細(xì)胞呈上皮樣與圓形混合形態(tài),懸浮生長(zhǎng)時(shí)以單細(xì)胞及小細(xì)胞團(tuán)(含 5-20 個(gè)細(xì)胞)為主,胞質(zhì)均勻,核質(zhì)比高,較親本貼壁細(xì)胞形態(tài)更圓潤(rùn)。在 37℃、5% CO?的生物反應(yīng)器中,使用無血清 CDM 培養(yǎng)基(含重組胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白),倍增時(shí)間約 28-32 小時(shí),比生長(zhǎng)速率(μ)達(dá) 0.025/h,顯著高于貼壁 Marc-145 細(xì)胞(0.018/h)。細(xì)胞密度可穩(wěn)定維持在 2×10?-4×10? cells/mL,最高密度達(dá) 6×10? cells/mL(灌流培養(yǎng)條件),連續(xù)傳代 80 次后生長(zhǎng)特性無顯著變化,凍存復(fù)蘇存活率超 95%。
  1. 功能特性

  • 病毒敏感性:對(duì) PRRSV 的感染效率達(dá) 95% 以上(流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) N 蛋白),48 小時(shí)病毒滴度達(dá) 10?.?-10?.? TCID??/mL,與貼壁細(xì)胞相當(dāng);對(duì) PRRSV 的美洲型、歐洲型及高致病性變異株均具有廣譜適應(yīng)性,滴度差異<0.3 個(gè)數(shù)量級(jí),優(yōu)于其他猴源懸浮細(xì)胞系(如 Vero-S)。

  • 受體表達(dá):PRRSV 主要受體 CD163 的表達(dá)量達(dá) 1.1×10?分子 / 細(xì)胞(流式檢測(cè)),與貼壁 Marc-145 無顯著差異,為病毒入侵提供充足分子基礎(chǔ)。

  • 代謝特征:葡萄糖消耗速率為 22 mg/10? cells / 天,乳酸積累速率較貼壁細(xì)胞降低 35%(僅 0.18 g/10? cells / 天),谷an酰胺利用率提升 20%,更適合高密度長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng),可延長(zhǎng)病毒復(fù)制平臺(tái)期至 72 小時(shí)。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. PRRSV 疫苗規(guī)模化生產(chǎn)

  • 滅活疫苗生產(chǎn):在 500L 攪拌式生物反應(yīng)器中,Marc-145XF 細(xì)胞密度達(dá) 3×10? cells/mL,PRRSV 病毒滴度穩(wěn)定在 10? TCID??/mL,單批次病毒產(chǎn)量達(dá) 1.5×1011 TCID??,可生產(chǎn) 1500 萬劑滅活疫苗,較傳統(tǒng)轉(zhuǎn)瓶工藝效率提升 15 倍,生產(chǎn)成本降低 50%。疫苗中宿主細(xì)胞蛋白殘留量<20ng / 劑,無血清培養(yǎng)體系避免了血清源性過敏原,使疫苗過敏反應(yīng)發(fā)生率下降 40%(臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù))。

  • 弱毒疫苗株篩選:利用其高效病毒復(fù)制能力,可快速評(píng)估疫苗株的減毒特性與免疫原性。例如,在該細(xì)胞系中連續(xù)傳代 PRRSV 獲得的弱毒株,對(duì)仔豬的致病力下降 90%,且免疫后中和抗體效價(jià)達(dá) 1:256,保護(hù)率超 90%,為弱毒疫苗開發(fā)提供候選株。

  1. 病毒學(xué)基礎(chǔ)研究與高通量篩選

  • 復(fù)制動(dòng)力學(xué)研究:通過懸浮培養(yǎng)的均一性,精準(zhǔn)測(cè)定 PRRSV 的復(fù)制參數(shù):潛伏期 5-6 小時(shí),對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 12-24 小時(shí),穩(wěn)定期 24-60 小時(shí),為優(yōu)化疫苗生產(chǎn)的收獲時(shí)間提供數(shù)據(jù)支撐(最佳收獲點(diǎn)為 48-54 小時(shí))。

  • 抗病du藥物篩選:在 384 孔懸浮培養(yǎng)板中,可實(shí)現(xiàn)日均 1000 種化合物的高通量篩選。例如,篩選出的 PRRSV 3CL 蛋白酶抑制劑在該模型中 EC??=0.8μM,與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致性達(dá) 0.94,為抗 PRRSV 藥物研發(fā)提供先導(dǎo)分子。

  1. 其他病毒培養(yǎng)拓展應(yīng)用

  • 豬圓環(huán)病毒 2 型(PCV2)共培養(yǎng):可支持 PCV2 與 PRRSV 的共感染,模擬臨床混合感染場(chǎng)景,共感染時(shí)兩種病毒滴度與單獨(dú)感染差異<10%,為研究病毒間相互作用提供模型。

  • 病毒樣顆粒(VLP)表達(dá):作為桿狀病毒載體的宿主細(xì)胞,可高效表達(dá) PRRSV S 蛋白 VLP,產(chǎn)量達(dá) 8μg/10? cells,純度超 95%,免疫小鼠后誘導(dǎo)的中和抗體效價(jià)與滅活疫苗相當(dāng),為亞單位疫苗研發(fā)提供低成本生產(chǎn)平臺(tái)。

三、培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)
  1. 基礎(chǔ)培養(yǎng)方案

  • 培養(yǎng)基:無血清 CDM 培養(yǎng)基(含 5μg/mL 重組胰島素、3μg/mL 轉(zhuǎn)鐵蛋白),添加 4mM L - 谷an酰胺,pH 維持在 7.2-7.4,需每日監(jiān)測(cè)葡萄糖濃度(維持>1.5g/L)與溶氧(30%-50%)。

  • 傳代流程:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞懸液,1000rpm 離心 5 分鐘,棄上清后用新鮮培養(yǎng)基重懸,按初始密度 8×10? cells/mL 接種至搖瓶(轉(zhuǎn)速 110rpm)或生物反應(yīng)器,避免細(xì)胞團(tuán)過大(>150μm)導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)不均。

  • 凍存保護(hù):取密度 3×10? cells/mL 的細(xì)胞,加入含 10% DMSO 的無血清凍存液,程序降溫后液氮保存,復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴快速解凍,直接接種至預(yù)熱培養(yǎng)基(無需離心洗滌),24 小時(shí)后細(xì)胞存活率>90%。

  1. 病毒培養(yǎng)與放大工藝

  • PRRSV 接種:細(xì)胞密度達(dá) 2×10? cells/mL 時(shí),按 MOI=0.001 加入病毒液,維持?jǐn)嚢杷俾?120rpm,溶氧 50%,感染后 36 小時(shí)補(bǔ)加 30% 體積的新鮮培養(yǎng)基(含 2× 谷an酰胺),48-54 小時(shí)收獲病毒液,通過 0.45μm 濾膜澄清。

  • 生物反應(yīng)器控制:采用 pH-stat 補(bǔ)料策略,當(dāng) pH>7.3 時(shí)自動(dòng)補(bǔ)加 500g/L 葡萄糖溶液,維持代謝穩(wěn)定,可使病毒滴度提升 15%-20%。

四、優(yōu)勢(shì)與局限性
  • 優(yōu)勢(shì)

  1. 工業(yè)化生產(chǎn)能力:懸浮培養(yǎng)可通過生物反應(yīng)器實(shí)現(xiàn)大規(guī)模擴(kuò)增,單批次產(chǎn)量滿足千wan級(jí)疫苗需求,適合 PRRS 疫情暴發(fā)時(shí)的應(yīng)急生產(chǎn)。

  1. 安全性提升:無血清培養(yǎng)體系減少動(dòng)物源成分污染風(fēng)險(xiǎn),符合 WHO 生物制品 GMP 標(biāo)準(zhǔn),疫苗質(zhì)量更易控制。

  1. 成本效益顯著:較貼壁培養(yǎng)減少 90% 的培養(yǎng)面積,人力成本降低 60%,且病毒單位體積產(chǎn)量提升 5-8 倍。

  • 局限性

  1. 培養(yǎng)基成本高:無血清 CDM 培養(yǎng)基價(jià)格為傳統(tǒng)血清培養(yǎng)基的 6-8 倍,初期投入較高。

  1. 技術(shù)門檻:需掌握懸浮細(xì)胞計(jì)數(shù)、生物反應(yīng)器參數(shù)調(diào)控等技能,對(duì)操作人員要求嚴(yán)格。

  1. 病毒譜較窄:主要適用于 PRRSV 培養(yǎng),對(duì)其他病毒(如豬瘟病毒)的支持能力有限。

五、研究意義與展望
Marc-145XF 細(xì)胞系的建立推動(dòng)了 PRRSV 疫苗生產(chǎn)技術(shù)的升級(jí),其無血清懸浮培養(yǎng)工藝使疫苗產(chǎn)量與安全性得到雙重提升,為*養(yǎng)豬業(yè) PRRS 防控提供了關(guān)鍵支撐。技術(shù)層面,其馴化策略為其他貼壁細(xì)胞(如 MDCK、BHK-21)的懸浮改造提供了參考范式。未來,通過基因編輯技術(shù)過表達(dá) CD163 與 CD151(輔助受體),有望進(jìn)一步提升病毒產(chǎn)量;結(jié)合連續(xù)灌流培養(yǎng)與在線監(jiān)測(cè)技術(shù),可實(shí)現(xiàn) PRRSV 疫苗的連續(xù)化生產(chǎn),推動(dòng)獸用生物制品向智能化、高效化方向發(fā)展。

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