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首頁(yè)-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-1408RM-2獼猴腎細(xì)胞系

RM-2獼猴腎細(xì)胞系
產(chǎn)品型號(hào):BY-1408
簡(jiǎn)要描述:

RM-2獼猴腎細(xì)胞系,上皮樣,貼壁生長(zhǎng),保留腎細(xì)胞特性,對(duì)多種病毒敏感,支持高效復(fù)制,適用于病毒分離、腎損傷研究及相關(guān)藥物篩選。

  • 廠家實(shí)力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質(zhì)量保障

    Quality Assurance

詳細(xì)介紹

RM-2獼猴腎細(xì)胞系
RM-2獼猴腎細(xì)胞系是從成年獼猴腎臟組織分離建立的上皮細(xì)胞系,因保留靈長(zhǎng)類腎臟細(xì)胞的典型表型與功能特征,且對(duì)多種病毒具有廣譜敏感性,成為腎臟病毒學(xué)研究、腎損傷機(jī)制探索及泌尿系統(tǒng)藥物篩選的重要模型。其與人類腎細(xì)胞的高度同源性,為腎臟相關(guān)研究提供了接近臨床的實(shí)驗(yàn)平臺(tái),尤其在腎毒性評(píng)估與病毒疫苗研發(fā)中具有重要應(yīng)用價(jià)值。
一、細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
  1. 來(lái)源與建立背景

RM-2 細(xì)胞系源自健康獼猴的腎臟皮質(zhì)組織,通過(guò)組織塊培養(yǎng)法結(jié)合細(xì)胞解離技術(shù)獲得原代腎小管上皮細(xì)胞,經(jīng) 30 代連續(xù)傳代純化后建立穩(wěn)定細(xì)胞系(“RM" 代表獼猴,“2" 為該系列細(xì)胞的第 2 株克隆)。該細(xì)胞系保留了腎小管上皮細(xì)胞的分化特征,其建立填bu了靈長(zhǎng)類腎臟細(xì)胞模型的空白,克服了嚙齒類模型與人類腎臟結(jié)構(gòu)差異大的局限,為腎臟疾病轉(zhuǎn)化研究提供了理想工具。
  1. 形態(tài)與生長(zhǎng)特征

細(xì)胞呈典型上皮樣形態(tài),貼壁生長(zhǎng)時(shí)呈多邊形,排列緊密如鋪路石狀,胞質(zhì)豐富且含細(xì)小顆粒,細(xì)胞核呈圓形或橢圓形位于細(xì)胞中央。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 DMEM/Ham's F12 培養(yǎng)基,倍增時(shí)間約 38-44 小時(shí),傳代比例 1:3 至 1:4,每周換液 2-3 次以維持細(xì)胞融合度在 60%-70%。細(xì)胞凍存復(fù)蘇存活率超 85%,連續(xù)傳代 50 次后仍保持穩(wěn)定的生長(zhǎng)特性,核型分析顯示保留獼猴二倍體特征(2n=42),染色體畸變率<5%,符合實(shí)驗(yàn)細(xì)胞質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
  1. 功能特性

  • 表型標(biāo)志物表達(dá):高表達(dá)腎小管上皮細(xì)胞特異性標(biāo)志物,如細(xì)胞角蛋白 18(CK18)、鈉 - 葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 2(SGLT2),免疫熒光陽(yáng)性率>95%;同時(shí)具有活躍的離子轉(zhuǎn)運(yùn)功能,可通過(guò)檢測(cè) Na?/K?-ATP 酶活性(達(dá) 110μmol Pi/mg protein/h)評(píng)估細(xì)胞功能完整性,與原代腎小管上皮細(xì)胞水平相當(dāng)。

  • 病毒敏感性:對(duì)多種病毒具有廣譜敏感性,尤其對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒、腺病毒、腎綜合征出血熱病毒的感染效率達(dá) 90% 以上,48 小時(shí)病毒滴度可達(dá) 10?-10? TCID??/mL,感染后 24 小時(shí)出現(xiàn)典型細(xì)胞病變(細(xì)胞圓縮、脫落、形成空斑);對(duì)部分肝炎病毒也具有一定支持能力,可檢測(cè)到相關(guān)病毒抗原分泌,為肝 - 腎綜合征研究提供模型。

  • 腎臟功能模擬:在體外可形成極性單層結(jié)構(gòu),具有一定的尿液濃縮與物質(zhì)重吸收功能,對(duì)葡萄糖的重吸收率達(dá) 32%(通過(guò)放射性同位素標(biāo)記法檢測(cè)),能響應(yīng)血管緊張素 Ⅱ 的刺激(細(xì)胞內(nèi) Ca2?濃度升高 2 倍),模擬腎臟的生理調(diào)節(jié)過(guò)程。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 病毒學(xué)研究與疫苗研發(fā)

  • 病毒分離與鑒定:可用于從臨床樣本中分離腎臟嗜性病毒,如腎綜合征出血熱患者尿液樣本接種后,72 小時(shí)即可觀察到典型細(xì)胞病變,分離效率達(dá) 85%,較傳統(tǒng)細(xì)胞系縮短 12-24 小時(shí),為疫情快速診斷提供技術(shù)支持。

  • 疫苗生產(chǎn)與評(píng)估:因?qū)顾杌屹|(zhì)炎病毒的高敏感性,可用于脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗的生產(chǎn)工藝優(yōu)化。在微載體培養(yǎng)系統(tǒng)中,病毒滴度達(dá) 10?.? TCID??/mL,單批次產(chǎn)量較轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)提升 6 倍,疫苗中殘留宿主細(xì)胞 DNA<10pg / 劑,符合 WHO 生物制品標(biāo)準(zhǔn)。

  1. 腎臟疾病機(jī)制研究

  • 腎小管損傷模型構(gòu)建:通過(guò)特定藥物處理建立藥物性腎損傷模型,RM-2 細(xì)胞在一定濃度藥物作用 48 小時(shí)后,凋亡率達(dá) 38%,同時(shí)伴有腎損傷分子 1(KIM-1)表達(dá)上調(diào) 7 倍,與人類藥物性腎損傷的分子特征高度一致,為研究腎小管修復(fù)機(jī)制提供平臺(tái)。

  • 腎臟纖維化研究:在 TGF-β1 刺激下,RM-2 細(xì)胞可發(fā)生上皮 - 間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),α- 平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)表達(dá)上調(diào) 5 倍,膠原分泌量增加 3 倍,模擬腎臟纖維化的病理過(guò)程,用于篩選抗纖維化藥物。

  1. 藥物腎毒性評(píng)價(jià)與篩選

  • 腎毒性預(yù)測(cè):可用于評(píng)估藥物的腎臟安全性,通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞活力、乳酸脫氫酶釋放及 KIM-1 分泌,建立藥物腎毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。例如,某非甾體抗炎藥在一定濃度下即可導(dǎo)致 RM-2 細(xì)胞活力下降 50%,與臨床報(bào)道的腎毒性劑量一致,預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率達(dá) 82%。

  • 腎臟保護(hù)藥物篩選:基于藥物損傷模型,篩選具有腎保護(hù)作用的化合物。發(fā)現(xiàn)某天然產(chǎn)物衍生物可將藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率從 38% 降至 14%,同時(shí)降低活性氧(ROS)水平 28%,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示其可改善藥物導(dǎo)致的腎功能損傷(血肌酐水平下降 38%),為腎保護(hù)藥物研發(fā)提供候選分子。

三、培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)
  1. 基礎(chǔ)培養(yǎng)方案

  • 培養(yǎng)基:DMEM/Ham's F12(1:1)培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸,pH 維持在 7.2-7.4,可加入 5ng/mL 表皮生長(zhǎng)因子(EGF)促進(jìn)細(xì)胞增殖與功能維持。

  • 傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 70%-80% 時(shí),棄舊培養(yǎng)基,PBS 洗滌 2 次,加入細(xì)胞解離液,37℃孵育 4-5 分鐘至細(xì)胞脫落,加入含血清的培養(yǎng)基終止解離,按 1:3 比例接種至新培養(yǎng)瓶,避免過(guò)度融合導(dǎo)致細(xì)胞極性丟失。

  • 凍存保護(hù):取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基重懸至密度 1×10?個(gè) /mL,程序降溫后液氮保存,復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴快速解凍,離心去除 DMSO 后接種,傳代 2 次待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后使用。

  1. 病毒培養(yǎng)與功能實(shí)驗(yàn)操作

  • 病毒接種:細(xì)胞以 3×10?個(gè) / 孔接種 24 孔板,培養(yǎng) 24 小時(shí)至融合度 60%,用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋病毒(MOI=0.1),37℃吸附 1 小時(shí),換含 2% 血清的維持液,72 小時(shí)后通過(guò) TCID??法測(cè)定病毒滴度,或通過(guò)免疫熒光檢測(cè)病毒抗原。

  • 腎毒性檢測(cè):細(xì)胞以 5×103 個(gè) / 孔接種 96 孔板,培養(yǎng) 24 小時(shí)后加入梯度濃度藥物,繼續(xù)培養(yǎng) 48 小時(shí),通過(guò) CCK-8 法檢測(cè)細(xì)胞活力,同時(shí)收集上清檢測(cè) KIM-1 含量,綜合評(píng)估藥物腎毒性。

四、優(yōu)勢(shì)與局限性
  • 優(yōu)勢(shì)

  1. 靈長(zhǎng)類模型優(yōu)勢(shì):與人類腎臟細(xì)胞的基因同源性達(dá) 94% 以上,生物學(xué)特征高度相似,研究結(jié)果的臨床轉(zhuǎn)化價(jià)值顯著高于嚙齒類模型。

  1. 功能完整性:保留腎小管上皮細(xì)胞的病毒敏感性與腎臟功能特征,可模擬體內(nèi)腎臟的生理與病理過(guò)程,適合多領(lǐng)域研究。

  1. 應(yīng)用范圍廣:既可用于病毒學(xué)研究與疫苗生產(chǎn),又能支撐腎臟疾病機(jī)制探索與藥物篩選,適用場(chǎng)景多樣。

  • 局限性

  1. 來(lái)源限制:獼猴為保護(hù)動(dòng)物,細(xì)胞系獲取受倫理與資源限制,成本較高。

  1. 培養(yǎng)要求高:對(duì)培養(yǎng)基成分敏感,無(wú)血清培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞活力下降 28%,增加大規(guī)模應(yīng)用難度。

  1. 結(jié)構(gòu)單一性:僅模擬腎小管上皮細(xì)胞功能,缺乏腎小球、腎間質(zhì)等結(jié)構(gòu),無(wú)法wan全復(fù)制腎臟的復(fù)雜微環(huán)境。

五、研究意義與展望
RM-2 獼猴腎細(xì)胞系的建立為腎臟相關(guān)研究提供了重要工具,其在病毒疫苗研發(fā)中的應(yīng)用,推動(dòng)了脊髓灰質(zhì)炎等疫苗的生產(chǎn)工藝優(yōu)化;在腎臟疾病研究中,助力解析腎小管損傷與修復(fù)機(jī)制,為腎病治療提供新靶點(diǎn)。未來(lái),通過(guò)基因編輯技術(shù)引入人源化病毒受體或疾病相關(guān)突變基因,可進(jìn)一步提升模型的臨床相關(guān)性;結(jié)合器官芯片技術(shù)構(gòu)建 “腎臟芯片" 模型,有望模擬完整腎臟功能,為藥物研發(fā)與疾病研究提供更接近體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。

以上信息僅供參考,詳細(xì)信息請(qǐng)聯(lián)系我們。

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