產(chǎn)品系統(tǒng)PRODUCT CENTER
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首頁(yè)-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-1408RM-2獼猴腎細(xì)胞系


廠家實(shí)力
Manufacturer Strength
有效保修
Valid Warranty
質(zhì)量保障
Quality Assurance產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES
詳細(xì)介紹
來(lái)源與建立背景
形態(tài)與生長(zhǎng)特征
功能特性
表型標(biāo)志物表達(dá):高表達(dá)腎小管上皮細(xì)胞特異性標(biāo)志物,如細(xì)胞角蛋白 18(CK18)、鈉 - 葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 2(SGLT2),免疫熒光陽(yáng)性率>95%;同時(shí)具有活躍的離子轉(zhuǎn)運(yùn)功能,可通過(guò)檢測(cè) Na?/K?-ATP 酶活性(達(dá) 110μmol Pi/mg protein/h)評(píng)估細(xì)胞功能完整性,與原代腎小管上皮細(xì)胞水平相當(dāng)。
病毒敏感性:對(duì)多種病毒具有廣譜敏感性,尤其對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒、腺病毒、腎綜合征出血熱病毒的感染效率達(dá) 90% 以上,48 小時(shí)病毒滴度可達(dá) 10?-10? TCID??/mL,感染后 24 小時(shí)出現(xiàn)典型細(xì)胞病變(細(xì)胞圓縮、脫落、形成空斑);對(duì)部分肝炎病毒也具有一定支持能力,可檢測(cè)到相關(guān)病毒抗原分泌,為肝 - 腎綜合征研究提供模型。
腎臟功能模擬:在體外可形成極性單層結(jié)構(gòu),具有一定的尿液濃縮與物質(zhì)重吸收功能,對(duì)葡萄糖的重吸收率達(dá) 32%(通過(guò)放射性同位素標(biāo)記法檢測(cè)),能響應(yīng)血管緊張素 Ⅱ 的刺激(細(xì)胞內(nèi) Ca2?濃度升高 2 倍),模擬腎臟的生理調(diào)節(jié)過(guò)程。
病毒學(xué)研究與疫苗研發(fā)
病毒分離與鑒定:可用于從臨床樣本中分離腎臟嗜性病毒,如腎綜合征出血熱患者尿液樣本接種后,72 小時(shí)即可觀察到典型細(xì)胞病變,分離效率達(dá) 85%,較傳統(tǒng)細(xì)胞系縮短 12-24 小時(shí),為疫情快速診斷提供技術(shù)支持。
疫苗生產(chǎn)與評(píng)估:因?qū)顾杌屹|(zhì)炎病毒的高敏感性,可用于脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗的生產(chǎn)工藝優(yōu)化。在微載體培養(yǎng)系統(tǒng)中,病毒滴度達(dá) 10?.? TCID??/mL,單批次產(chǎn)量較轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)提升 6 倍,疫苗中殘留宿主細(xì)胞 DNA<10pg / 劑,符合 WHO 生物制品標(biāo)準(zhǔn)。
腎臟疾病機(jī)制研究
腎小管損傷模型構(gòu)建:通過(guò)特定藥物處理建立藥物性腎損傷模型,RM-2 細(xì)胞在一定濃度藥物作用 48 小時(shí)后,凋亡率達(dá) 38%,同時(shí)伴有腎損傷分子 1(KIM-1)表達(dá)上調(diào) 7 倍,與人類藥物性腎損傷的分子特征高度一致,為研究腎小管修復(fù)機(jī)制提供平臺(tái)。
腎臟纖維化研究:在 TGF-β1 刺激下,RM-2 細(xì)胞可發(fā)生上皮 - 間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),α- 平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)表達(dá)上調(diào) 5 倍,膠原分泌量增加 3 倍,模擬腎臟纖維化的病理過(guò)程,用于篩選抗纖維化藥物。
藥物腎毒性評(píng)價(jià)與篩選
腎毒性預(yù)測(cè):可用于評(píng)估藥物的腎臟安全性,通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞活力、乳酸脫氫酶釋放及 KIM-1 分泌,建立藥物腎毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。例如,某非甾體抗炎藥在一定濃度下即可導(dǎo)致 RM-2 細(xì)胞活力下降 50%,與臨床報(bào)道的腎毒性劑量一致,預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率達(dá) 82%。
腎臟保護(hù)藥物篩選:基于藥物損傷模型,篩選具有腎保護(hù)作用的化合物。發(fā)現(xiàn)某天然產(chǎn)物衍生物可將藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率從 38% 降至 14%,同時(shí)降低活性氧(ROS)水平 28%,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示其可改善藥物導(dǎo)致的腎功能損傷(血肌酐水平下降 38%),為腎保護(hù)藥物研發(fā)提供候選分子。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基:DMEM/Ham's F12(1:1)培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸,pH 維持在 7.2-7.4,可加入 5ng/mL 表皮生長(zhǎng)因子(EGF)促進(jìn)細(xì)胞增殖與功能維持。
傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 70%-80% 時(shí),棄舊培養(yǎng)基,PBS 洗滌 2 次,加入細(xì)胞解離液,37℃孵育 4-5 分鐘至細(xì)胞脫落,加入含血清的培養(yǎng)基終止解離,按 1:3 比例接種至新培養(yǎng)瓶,避免過(guò)度融合導(dǎo)致細(xì)胞極性丟失。
凍存保護(hù):取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基重懸至密度 1×10?個(gè) /mL,程序降溫后液氮保存,復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴快速解凍,離心去除 DMSO 后接種,傳代 2 次待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后使用。
病毒培養(yǎng)與功能實(shí)驗(yàn)操作
病毒接種:細(xì)胞以 3×10?個(gè) / 孔接種 24 孔板,培養(yǎng) 24 小時(shí)至融合度 60%,用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋病毒(MOI=0.1),37℃吸附 1 小時(shí),換含 2% 血清的維持液,72 小時(shí)后通過(guò) TCID??法測(cè)定病毒滴度,或通過(guò)免疫熒光檢測(cè)病毒抗原。
腎毒性檢測(cè):細(xì)胞以 5×103 個(gè) / 孔接種 96 孔板,培養(yǎng) 24 小時(shí)后加入梯度濃度藥物,繼續(xù)培養(yǎng) 48 小時(shí),通過(guò) CCK-8 法檢測(cè)細(xì)胞活力,同時(shí)收集上清檢測(cè) KIM-1 含量,綜合評(píng)估藥物腎毒性。
優(yōu)勢(shì):
靈長(zhǎng)類模型優(yōu)勢(shì):與人類腎臟細(xì)胞的基因同源性達(dá) 94% 以上,生物學(xué)特征高度相似,研究結(jié)果的臨床轉(zhuǎn)化價(jià)值顯著高于嚙齒類模型。
功能完整性:保留腎小管上皮細(xì)胞的病毒敏感性與腎臟功能特征,可模擬體內(nèi)腎臟的生理與病理過(guò)程,適合多領(lǐng)域研究。
應(yīng)用范圍廣:既可用于病毒學(xué)研究與疫苗生產(chǎn),又能支撐腎臟疾病機(jī)制探索與藥物篩選,適用場(chǎng)景多樣。
局限性:
來(lái)源限制:獼猴為保護(hù)動(dòng)物,細(xì)胞系獲取受倫理與資源限制,成本較高。
培養(yǎng)要求高:對(duì)培養(yǎng)基成分敏感,無(wú)血清培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞活力下降 28%,增加大規(guī)模應(yīng)用難度。
結(jié)構(gòu)單一性:僅模擬腎小管上皮細(xì)胞功能,缺乏腎小球、腎間質(zhì)等結(jié)構(gòu),無(wú)法wan全復(fù)制腎臟的復(fù)雜微環(huán)境。
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