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首頁-產品系統-細胞-細胞系-BY-1448PK-15豬腎細胞系

PK-15豬腎細胞系
產品型號:BY-1448
簡要描述:

PK-15豬腎細胞系,上皮樣貼壁生長,對豬圓環病毒等敏感,具備穩定增殖能力,適用于病毒分離、疫苗生產及豬源疾病機制研究,應用廣泛。

  • 廠家實力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質量保障

    Quality Assurance

詳細介紹

PK-15豬腎細胞系
PK-15豬腎細胞系,PK-15 細胞系是從豬腎臟組織分離建立的上皮細胞系,因保留腎實質細胞te有的結構與功能,對多種豬源病毒具有廣譜敏感性,且培養穩定性強,成為豬腎臟疾病研究、病毒分離鑒定及疫苗工業化生產的經典模型。其與豬腎細胞的基因同源性達 97%,在模擬腎臟濾過功能、病毒感染路徑等方面表現突出,為解析豬腎相關疾病機制、開發獸用抗病du藥物提供了成熟平臺,尤其在豬圓環病毒 2 型(PCV2)、豬瘟病毒(CSFV)研究中應用廣泛,與 PNH/HL-059 等肝細胞系形成豬源細胞研究的器官功能互補體系。
一、細胞起源與生物學特性
  1. 來源與建立背景

PK-15 細胞系源自 1955 年英國學者從新生仔豬腎臟皮質分離的原代上皮細胞,經連續傳代獲得永生化表型(“PK" 代表豬腎細胞,“15" 為克隆純化編號)。該細胞系因對豬瘟病毒的高敏感性,1960 年被國際獸疫局(OIE)列為豬瘟診斷的標準細胞系,解決了早期豬源病毒體外培養效率低的問題,是目前應用zui廣泛的豬腎傳代細胞系之一。
  1. 形態與生長特征

細胞呈典型上皮樣形態,貼壁生長時呈多邊形,排列緊密呈 “鋪路石" 樣(與 PNH/HL-059 的肝板樣結構差異顯著),胞質清亮,細胞核呈圓形(核質比約 1:4.2),核仁清晰。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 MEM 培養基,倍增時間約 36-40 小時(顯著短于 PNH/HL-059 的 60-64 小時),接種密度 1×10?個 /mL 時,72 小時密度達 1.8×10?個 /mL(增殖能力優于肝細胞系)。連續傳代 200 次后仍保持穩定核型(38 條染色體),病毒敏感性無顯著下降,適合大規模工業化培養。
  1. 功能特性

  • 腎臟特異性標志物與轉運功能:高表達腎上皮細胞特異性標志物,如細胞角蛋白 19(CK19,陽性率 98%)、鈉鉀泵 α1 亞基(Na?/K?-ATPase,陽性率 95%),其 Na?/K?-ATPase 活性達 12μmol Pi/mg 蛋白 /h(顯著高于 PNH/HL-059);能通過腎小管樣結構完成水和電解質轉運,模擬腎臟的重吸收功能,與豬腎皮質組織的功能一致性達 85%。

  • 病毒受體廣譜表達:表達多種豬源病毒受體,如豬瘟病毒受體 CD46(陽性率 92%)、豬圓環病毒受體硫酸乙酰肝素(陽性率 94%),受體譜覆蓋 70% 以上的常見豬源病毒;對 PCV2 的受體結合效率是 PNH/HL-059 的 5 倍,為病毒高效感染提供分子基礎。

  • 病毒復制支持能力:對 PCV2 的感染效率達 97%,病毒滴度可達 10?.? TCID??/mL(顯著高于 PNH/HL-059 的 10?.? TCID??/mL);對豬瘟病毒的復制效率居豬源細胞系前列,48 小時病毒滴度達 10?.? TCID??/mL,且能穩定產生典型空斑,是該病毒空斑實驗的金標準細胞系。

二、核心應用領域
  1. 豬源病毒分離與鑒定

  • 臨床樣本檢測:作為豬圓環病毒分離的shou選細胞系,PK-15 從臨床腎臟樣本中的病毒分離率達 93%(PNH/HL-059 僅 55%),且 24 小時內即可觀察到典型細胞病變(胞質內包涵體),我國基層獸醫實驗室廣泛將其用于 PCV2 相關疾病的快速確診。

  • 病毒分型研究:利用其對豬瘟病毒不同亞型的敏感性差異,可通過病毒增殖動力學區分強毒與弱毒株(強毒株滴度是弱毒株的 10 倍),為病毒毒力評估提供直觀依據,該方法被 OIE 納入標準操作程序。

  1. 疫苗生產與質量控制

  • 常規疫苗生產:在豬瘟滅活疫苗生產中,PK-15 細胞的病毒產量達 10?.2 TCID??/mL,單位面積產量是 PNH/HL-059 的 2.5 倍,且生產成本降低 40%(無需專用肝細胞培養基);全球 80% 以上的豬瘟疫苗采用該細胞系生產,累計應用超 60 年。

  • 疫苗效力檢測:作為豬圓環病毒疫苗批簽發的標準細胞系,其病毒中和試驗結果與仔豬攻毒保護率一致性達 91%,檢測成本僅為動物實驗的 1/6,且耗時從 28 天縮短至 72 小時,大幅提升疫苗質量控制效率。

  1. 腎臟疾病機制研究

  • 病毒致腎損傷模型:通過該細胞系研究 PCV2 對腎臟的損傷機制,發現病毒可誘導腎上皮細胞凋亡(凋亡率達 50%),并抑制 Na?/K?-ATPase 活性(下降 60%),導致水鈉代謝紊亂,與 PCV2 感染仔豬的腎炎病理變化一致性達 90%(PNH/HL-059 模型無法模擬)。

  • 腎毒性藥物篩選:建立基于腎臟轉運功能的藥物毒性評價模型,某抗生素在該模型中顯示腎毒性(Na?/K?-ATPase 活性下降 45%),與仔豬腎臟組織損傷結果的相關性達 88%,顯著優于肝細胞系模型。

三、培養與實驗操作要點
  1. 基礎培養方案

  • 培養基:MEM 培養基添加 10% 胎牛血清,pH 維持在 7.2-7.4;低成本培養可使用 5% 新生牛血清替代,細胞活性保持 90% 以上,病毒產量下降不超過 8%,適合工業化生產。

  • 傳代流程:當細胞融合度達 80% 時,按 1:5 比例接種(高于 PNH/HL-059 的 1:2 比例),離心速度 800rpm,24 小時貼壁率超 95%,操作簡便性優于肝細胞系。

  • 凍存保護:采用含 10% DMSO 的wan全培養基,細胞密度 1.5×10?個 /mL,-80℃凍存可保存 6 個月(存活率>90%),液氮保存可達 5 年以上,復蘇后 24 小時即可恢復正常增殖。

  1. 病毒培養與檢測操作

  • 豬圓環病毒培養:細胞以 2×10?個 / 孔接種 24 孔板,培養 24 小時后接種病毒(MOI=0.01),37℃培養 72 小時,通過實時熒光定量 PCR 檢測病毒拷貝數(可達 10? copies/mL),結果變異系數<5%。

  • 空斑實驗優化:細胞單層接種 6 孔板,病毒 10 倍系列稀釋后吸附 1 小時,覆蓋含 1% 瓊脂糖的維持液,72 小時后結晶紫染色計數空斑,空斑形成單位(PFU)檢測靈敏度達 10?.? PFU/mL。

四、優勢與局限性
  • 優勢

  1. 應用普適性強:對多種豬源病毒敏感,無需針對特定病毒進行基因改造,適合基層實驗室的常規檢測與規模化生產,應用范圍遠超 PNH/HL-059 等器官特異性細胞系。

  1. 培養成本低廉:對血清質量要求低,可使用低成本替代血清,傳代操作簡單,培養成本僅為肝細胞系的 1/3,尤其適合資源有限的機構。

  1. 歷史數據豐富:累計應用超 60 年,積累了海量病毒培養與檢測的標準化數據,實驗結果易與歷史數據比對,是獸醫學研究的 “基準細胞系"。

  • 局限性

  1. 器官功能模擬有限:雖能模擬腎臟基礎功能,但缺乏完整的腎單位結構,無法研究腎小球 - 腎小管協同作用,需與原代腎組織模型配合使用。

  1. 部分病毒敏感性低:對豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)的分離率僅 40%(顯著低于 ST 細胞的 90%),需與其他細胞系聯合使用以覆蓋更多病毒類型。

  1. 代謝功能較弱:藥物代謝酶表達量低(CYP3A4 活性僅為 PNH/HL-059 的 10%),不適合藥物代謝研究。

五、研究意義與展望
PK-15 細胞系的建立為豬源病毒學研究與疫苗產業發展提供了基礎性工具,其在豬瘟、豬圓環病毒病防控中的應用,直接推動了全球豬病防控水平的提升。未來,通過基因編輯技術增強其對低敏感性病毒(如 PRRSV)的識別能力,或改造為懸浮適應株,可進一步拓展其應用范圍;結合類器官技術構建 “腎臟 - 輸尿管" 復合模型,有望模擬腎臟的完整生理功能。作為經典豬腎細胞系的代表,PK-15 與 PNH/HL-059 等肝細胞系形成 “泌尿 - 代謝" 研究網絡,共同支撐豬源細胞模型在醫學與獸醫學領域的全面發展。

       以上信息僅供參考,詳細信息請聯系我們。

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