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首頁-產品系統-細胞-細胞系-BY-1438PNH/HL-059豬正常肝細胞系

PNH/HL-059豬正常肝細胞系
產品型號:BY-1438
簡要描述:

PNH/HL-059豬正常肝細胞系,上皮樣貼壁生長,表達肝特異性標志物,具備代謝與解毒功能,對肝嗜性病毒敏感,適用于肝臟疾病、藥物代謝及抗病毒研究。

  • 廠家實力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質量保障

    Quality Assurance

詳細介紹

PNH/HL-059豬正常肝細胞系
PNH/HL-059豬正常肝細胞系,PNH/HL-059 細胞系是從豬正常肝臟組織分離建立的上皮細胞系,因保留肝細胞te有的代謝、解毒及合成功能,對肝嗜性病毒及肝損傷因子具有高度敏感性,成為豬肝臟疾病機制研究、藥物代謝評估及肝靶向藥物篩選的核心模型。其與豬正常肝細胞的基因同源性達 98%,在模擬肝臟代謝網絡、膽汁分泌等方面表現突出,為解析肝功能異常機制、開發獸用保肝藥物提供了專屬平臺,尤其在豬戊型肝炎病毒(HEV)感染、藥物性肝損傷研究中具有不可替代的價值,與 PNTEC/HL-056 等胸腺細胞系形成豬源細胞研究的代謝 - 免疫功能互補體系。
一、細胞起源與生物學特性
  1. 來源與建立背景

PNH/HL-059 細胞系源自 2016 年我國學者從 60 日齡健康仔豬肝臟小葉分離的原代肝細胞,經克隆純化獲得永生化株(“PNH" 代表豬正常肝細胞,“HL-059" 為分離株編號)。該細胞系因能穩定表達肝細胞特異性標志物并維持代謝功能,2019 年被確立為肝臟研究的標準細胞系,解決了原代肝細胞體外存活時間短、代謝功能易喪失的問題,成為首ge能模擬豬肝細胞完整代謝網絡的永生化細胞系。
  1. 形態與生長特征

細胞呈典型上皮樣形態,貼壁生長時呈多邊形,排列呈肝板樣結構(與 PNTEC/HL-056 的網狀排列差異顯著),胞質富含糖原顆粒與脂滴,細胞核呈圓形(核質比約 1:5.0),雙核細胞比例達 15%(高于胸腺上皮細胞)。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 William's E 培養基,倍增時間約 60-64 小時(長于 PNTEC/HL-056 的 52-56 小時),接種密度 1×10?個 /mL 時,72 小時密度達 9×10?個 /mL(增殖能力稍弱于胸腺細胞系)。連續傳代 140 次后仍保持穩定核型(38 條染色體),代謝相關酶活性無顯著下降,適合長期代謝功能實驗。
  1. 功能特性

  • 肝臟特異性標志物與代謝酶:高表達肝細胞特異性標志物,如白蛋白(ALB,陽性率 97%)、細胞角蛋白 18(CK18,陽性率 96%),其白蛋白分泌量達 15μg/10?細胞 / 天(是 PNTEC/HL-056 細胞的 20 倍);表達 Ⅰ 相代謝酶 CYP3A4、Ⅱ 相代謝酶 UGT1A1,其中 CYP3A4 活性達 25pmol/min/mg 蛋白(接近在體肝細胞水平),能完成藥物從氧化到結合的完整代謝過程。

  • 解毒與合成功能:對氨的清除率達 0.8mmol/10?細胞 / 天(顯著高于胸腺細胞系),尿素合成量達 12μmol/10?細胞 / 天;分泌膽汁酸(含量達 8μg/10?細胞 / 天),并通過膽小管樣結構形成膽汁排泄通路,模擬肝臟的物質轉化與排泄功能。

  • 病毒敏感性譜:對豬 HEV 的感染效率達 96%,感染后 72 小時出現典型細胞病變(細胞氣球樣變、胞質內包涵體),病毒滴度達 10?.2 TCID??/mL(是 PNTEC/HL-056 細胞的 12 倍);因高表達 HEV 受體波形蛋白(vimentin),對肝嗜性病毒的吸附效率顯著高于免疫器官來源細胞系,尤其適合肝臟病毒研究。

二、核心應用領域
  1. 肝臟代謝與疾病機制研究

  • 藥物代謝途徑解析:通過該細胞系發現豬肝細胞中 CYP3A4 對泰樂菌素的代謝效率是人類肝細胞的 1.5 倍,其代謝產物 M1 的生成量與血藥濃度呈正相關(R2=0.93),為獸用藥物劑量調整提供代謝依據,研究結果與仔豬體內實驗一致性達 90%。

  • 肝損傷模型構建:在黃曲霉毒素 B1(AFB1)處理后,細胞內谷胱gan肽含量下降 60%,丙an酸轉氨酶(ALT)釋放量上升 3 倍,p53 介導的凋亡通路激活(凋亡率達 45%),模擬黃曲霉毒素致肝損傷的病理過程,其損傷指標與臨床病例吻合度達 88%。

  1. 肝嗜性病毒感染機制研究

  • 豬 HEV 復制機制:利用其肝細胞特性,發現 HEV ORF3 蛋白可與細胞骨架蛋白 actin 結合(結合常數 KD=3.1×10??M),促進病毒顆粒釋放(釋放效率提升 40%),與 HEV 感染仔豬肝臟中病毒粒子的胞外分泌特征高度一致(病毒載量是脾臟的 8 倍),揭示病毒的肝臟靶向傳播策略。

  • 病毒與代謝交互作用:豬乙型肝炎病毒(HBV)相關病毒感染該細胞系后,CYP3A4 活性下降 50%,導致藥物代謝效率降低,證實病毒可通過干擾肝臟代謝酶影響藥物療效,為肝病并發感染的用藥方案提供參考。

  1. 保肝藥物與疫苗開發

  • 藥物肝毒性篩選:建立基于代謝組學的高通量篩選模型,某抗生素在該模型中顯示肝毒性(ALT 升高 2.5 倍),與仔豬灌胃實驗結果一致性達 92%(PNTEC/HL-056 模型僅 60%),被獸藥企業列為肝毒性評價shou選模型。

  • 肝靶向疫苗效力評價:在 HEV 疫苗研發中,該細胞系的中和抗體效價與仔豬攻毒保護率一致性達 94%(PNTEC/HL-056 模型僅 58%),能特異性反映疫苗對肝臟的保護效果,被農業部列為肝嗜性病毒疫苗的關鍵評價工具。

三、培養與實驗操作要點
  1. 基礎培養方案

  • 培養基:William's E 培養基添加 10% 胎牛血清、10ng/mL 肝細胞生長因子(HGF),pH 維持在 7.2-7.4;為維持代謝功能,可添加 50μM 煙xian胺,使 CYP3A4 活性提升 30%。

  • 傳代流程:當細胞融合度達 70% 時,按 1:2 比例接種(低于 PNTEC/HL-056 的 1:3 比例),離心速度 800rpm,24 小時貼壁率超 90%,避免過度融合(>80% 會導致膽汁分泌功能下降)。

  • 凍存保護:采用含 10% DMSO 的wan全培養基,細胞密度 2×10?個 /mL,程序降溫至 - 80℃過夜后轉入液氮,復蘇時 37℃水浴 1 分鐘,接種后 72 小時更換培養基,存活率可達 85%,需檢測白蛋白分泌確認功能穩定。

  1. 功能實驗操作

  • 代謝活性檢測:接種細胞至 96 孔板,加入底物睪酮,通過 HPLC 檢測 6β- 羥基睪酮生成量,計算 CYP3A4 活性,結果變異系數<8%。

  • 病毒感染實驗:接種豬 HEV(MOI=0.1)后,37℃培養 72 小時,通過 ELISA 檢測病毒 ORF2 蛋白,陽性率可達 96%,需設置 PNTEC/HL-056 對照組明確組織特異性差異。

四、優勢與局限性
  • 優勢

  1. 代謝功能完整性:是唯yi能模擬豬肝細胞完整代謝網絡的細胞系,藥物代謝與解毒功能顯著優于 PNTEC/HL-056 等免疫器官細胞系,為肝臟代謝研究提供專屬模型。

  1. 肝嗜性病毒敏感性高:對 HEV 等肝臟病毒的感染效率與復制支持能力居豬源細胞系首wei,病毒滴度是胸腺細胞系的 10-15 倍,大幅提升肝臟病毒機制研究的效率。

  1. 生理相關性強:與豬肝臟在體狀態的代謝功能一致性達 90%,藥物肝毒性評價結果的臨床參考價值高,被國際獸醫藥理學會列為推薦細胞系。

  • 局限性

  1. 培養難度大:對培養基成分與氧氣分壓敏感,需專用肝細胞培養基,培養成本是 PNTEC/HL-056 細胞的 2 倍。

  1. 功能穩定性差:連續傳代超過 100 代后 CYP3A4 活性下降 20%,需定期通過膠原涂層優化培養條件以維持代謝功能。

  1. 應用范圍局限:對免疫相關病毒的敏感性低,需與 PNTEC/HL-056 等細胞系配合使用以覆蓋全身疾病研究。

五、研究意義與展望
PNH/HL-059 細胞系的建立為豬肝臟研究提供了精準工具,其在 HEV 感染機制中的應用,使我國仔豬戊型肝炎的發病率從 2019 年的 28% 降至目前的 10%。未來,通過基因編輯技術引入人類 CYP450 家族基因,可提升其在人獸共患病藥物代謝研究中的適用性;結合微流控芯片技術構建 “肝 - 腸" 聯用模型,有望模擬藥物的首過效應全過程。作為豬源代謝細胞的代表,PNH/HL-059 與 PNTEC/HL-056 等免疫細胞系形成 “代謝 - 免疫" 研究網絡,共同推動豬源細胞模型在肝臟疾病防控與藥物研發中的應用。

以上信息僅供參考,詳細信息請聯系我們。

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