來源與構建：該細胞系以 CHO-K1 或 CHO-S 細胞為親本，通過慢病毒載體介導將人源 FVIII 基因（含 B 結構域缺失突變，提高表達效率）導入細胞基因組，經潮霉素抗性篩選及單克隆純化獲得穩定株?！皉FVIII-11" 代表其表達的重組蛋白及克隆編號，確保蛋白表達的均一性與功能性。構建過程中采用 CMV/EF1α 雙啟動子驅動表達，結合絕緣子元件減少基因沉默，顯著提升長期表達穩定性。

形態與增殖：體外培養呈上皮樣形態，兼具貼壁與懸浮生長能力，懸浮狀態下呈單個或小聚集體（直徑＜60μm），細胞圓潤飽滿，活力達 90% 以上。在 37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 28-36 小時，可適應無血清懸浮培養基（如 EX-CELL® CHO CD），傳代 50 次以上仍能維持穩定生長速率，高密度培養（細胞密度達 6×10?個 /mL）時 rFVIII 表達量無明顯下降。

表達特征：rFVIII 主要分泌至培養基中，表達量達 5-8 IU/10?細胞 / 24 小時（通過凝血法測定），長期傳代（＞40 代）后活性波動＜10%。該蛋白保留天然 FVIII 的 A1-A2-B-A3-C1-C2 結構域（部分株系含 B 結構域缺失），能與 vWF 因子結合，在凝血反應中可激活 FX，凝血活性達天然因子的 85% 以上，翻譯后修飾（如糖基化）接近人源天然蛋白。

優勢：rFVIII 表達穩定且活性高，長期傳代后功能無明顯衰減，優于瞬時表達系統；兼容懸浮培養與生物反應器放大，適合工業化生產，降低藥物成本；rFVIII 翻譯后修飾接近人源，免疫原性低，臨床應用安全性高；遺傳背景清晰，可通過基因編輯（如敲除蛋白酶基因）進一步提升蛋白產量與穩定性。

局限性：rFVIII 表達量仍受限于 CHO 細胞的翻譯后修飾能力，比活性略低于血漿來源 FVIII；培養過程需嚴格控制蛋白酶污染，避免 rFVIII 降解；無血清培養時需添加特定生長因子（如胰島素），增加培養基成本。

培養條件：常規使用無血清懸浮培養基，添加 400μg/mL 潮霉素維持抗性篩選，補加 L - 谷an酰胺與維生素 K（促進 γ- 羧化）。傳代時采用離心法（1000×g，5 分鐘）收集細胞，避免過度消化影響活性；懸浮培養轉速控制在 120-150 rpm，減少剪切力對細胞的損傷。

質控與凍存：定期通過凝血法檢測 rFVIII 活性，Western blot 驗證蛋白完整性；采用 PCR 法檢測支原體污染，STR 鑒定確保細胞純度。凍存時使用含 10% DMSO 的無血清凍存液，梯度降溫后保存于液氮，復蘇后傳代 2 次待活性穩定后再用于實驗。