P3X63Ag8.653小鼠骨髓瘤細胞系
P3X63Ag8.653小鼠骨髓瘤細胞系源自 BALB/c 小鼠的漿細胞瘤，是雜交瘤技術中制備單克隆抗體的重要細胞模型。作為次黃piao呤 - 鳥piao呤磷酸核糖轉移酶缺陷型（HGPRT?）細胞，它無法自主合成嘌呤核苷酸，且不分泌抗體，這些特性使其成為與 B 淋巴細胞融合的理想伙伴，在單克隆抗體制備領域發揮著關鍵作用。
在顯微鏡下觀察，該細胞呈典型的懸浮生長狀態，形態以圓形和類圓形為主，宛如在培養基中懸浮的微小 “球體"。細胞直徑約 14-18 微米，比普通淋巴細胞稍大；胞質豐富，因含有大量核糖體而呈現強嗜堿性，部分細胞內可見大小不一的空泡；細胞核大而圓，位于細胞中央，核質比約為 1:1，染色質疏松，核仁明顯且數量較多（通常 2-3 個），體現出活躍的增殖能力。細胞的倍增時間約為 28-40 小時，當細胞密度達到 1.5×10?-2.5×10?個 / 毫升時需要進行傳代，傳代時無需yi酶消化，只需輕柔吹打使細胞分散均勻，按 1:3-1:5 的比例接種到新的培養基中，連續傳代 40 次以上仍能保持穩定的生物學特性。
培養 P3X63Ag8.653 細胞需要營造適宜的生長環境。基礎培養基通常選擇 RPMI 1640，其中含有的谷an酰胺、丙酮酸等成分能夠滿足細胞高速代謝的需求；添加 10% 的熱滅活胎牛血清（FBS），可為細胞提供生長所需的各種因子，血清中的白細胞介素 - 6（IL-6）等對維持細胞的增殖活性尤為重要。培養環境需嚴格控制在 37℃、5% CO?的恒溫培養箱中，pH 值穩定在 7.2-7.4 之間，可通過培養基中的酚紅指示劑直觀監測酸堿變化。需要特別注意的是，該細胞對血清的質量較為敏感，劣質血清會導致細胞生長緩慢、聚集成團，因此每批血清都要經過至少 3 代的培養驗證，確保細胞存活率不低于 85%。
在雜交瘤技術中，P3X63Ag8.653 細胞系的 HGPRT?缺陷型特性是實現選擇性篩選的核心。當該細胞與免疫小鼠的脾細胞融合后，混合體系中會出現三種細胞：未融合的脾細胞（在體外只能存活 3-4 天）、未融合的骨髓瘤細胞以及融合后的雜交瘤細胞。將混合細胞置于含次黃piao呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶的 HAT 選擇培養基中培養時，由于氨基蝶呤阻斷了嘌呤和嘧啶的從頭合成途徑，未融合的骨髓瘤細胞因 HGPRT 缺陷，無法利用次黃piao呤合成嘌呤，最終會因核苷酸匱乏而死亡；而雜交瘤細胞則獲得了脾細胞的 HGPRT 基因，能夠在 HAT 培養基中存活并增殖，這一篩選機制大大提高了雜交瘤細胞的獲得效率。
在單克隆抗體制備過程中，該細胞系有助于提高陽性克隆的篩選效率。通過優化融合條件，如調整聚乙二醇（PEG）的濃度（常用 45% PEG 4000）、融合時間（約 1 分鐘）以及脾細胞與骨髓瘤細胞的比例（通常為 8:1-12:1），可以將融合率從 10??提升至 8×10??左右。同時，其不分泌抗體的特點，避免了融合后的雜交瘤細胞產生混合抗體，保證了單克隆抗體的純度和均一性，這一優勢使其在眾多骨髓瘤細胞系中占據一席之地。
在抗體相關研究中，P3X63Ag8.653 細胞系構建的雜交瘤能夠穩定分泌特異性抗體，為抗體的功能研究提供了便利。例如，在抗新guan病毒單克隆抗體的研發中，利用該細胞系與免疫小鼠脾細胞融合得到的雜交瘤細胞，分泌的抗體可特異性結合病毒的刺突蛋白，為后續的抗體中和活性檢測及機制研究奠定了基礎。此外，該細胞系還可用于研究抗體的表達調控機制，通過檢測不同培養條件下抗體的分泌量，探索影響抗體表達的因素，為提高單克隆抗體的產量提供參考。
在骨髓瘤疾病研究方面，該細胞系可模擬多發性骨髓瘤的部分病理特征。通過檢測細胞分泌的細胞因子（如 IL-6、VEGF）和基質金屬蛋白酶等，能夠探究骨髓瘤細胞與骨髓微環境之間的相互作用。研究發現，當該細胞與骨髓基質細胞共培養時，IL-6 的分泌量會增加 2 倍以上，進而促進自身的增殖，形成一個 “自分泌 - 旁分泌" 的循環，這一機制為開發針對多發性骨髓瘤的治療藥物提供了重要的實驗依據。
前沿研究中，P3X63Ag8.653 細胞系的應用范圍不斷擴大。借助 CRISPR 基因編輯技術，敲除細胞內與抗體合成相關的冗余基因，可構建更高效的融合細胞模型，提高雜交瘤細胞分泌抗體的效率；利用單細胞測序技術對融合后的雜交瘤細胞進行分析，能夠深入了解抗體基因的表達模式，為篩選高親和力的抗體提供新的思路和方法。
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