P3X63-Ag8.653小鼠骨髓瘤細胞系
P3X63-Ag8.653小鼠骨髓瘤細胞系源自 BALB/c 小鼠的 MOPC-21 骨髓瘤變種，是經(jīng) 8 - 氮鳥piao呤篩選獲得的次黃piao呤 - 鳥piao呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）缺陷型細胞系，在單克隆抗體制備、骨髓瘤發(fā)病機制及靶向藥物篩選研究中具有不可替代的價值，尤其作為雜交瘤融合的理想親本細胞，為單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展奠定了關(guān)鍵基礎(chǔ)。
該細胞系呈現(xiàn)典型的漿細胞形態(tài)與表型特征。顯微鏡下，細胞呈圓形或橢圓形，以懸浮生長為主，少量細胞貼壁生長，單個或成簇分布，細胞體積較大（直徑 15-20μm），核質(zhì)比高，細胞核呈圓形，偏位分布，染色質(zhì)呈粗塊狀，可見 1-2 個明顯核仁，核分裂象多見（每 10 個高倍視野 6-8 個），胞質(zhì)豐富，呈嗜堿性，可見空泡狀結(jié)構(gòu)（類似漿細胞的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張）。電鏡下可見胞質(zhì)內(nèi)充滿擴張的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，符合漿細胞合成和分泌蛋白的超微結(jié)構(gòu)特點。免疫表型分析顯示，細胞高表達 B 淋巴細胞分化標志物 CD138（ Syndecan-1，陽性率 92%）和 CD38（陽性率 88%），流式細胞術(shù)檢測顯示其 CD138 表達強度顯著高于其他骨髓瘤細胞系，而 B 細胞早期標志物 CD19 表達陰性，證實其漿細胞分化階段特性。因 HGPRT 缺陷，在 HAT 選擇培養(yǎng)基中無法存活，這一特性使其成為雜交瘤融合的理想親本（僅融合細胞可在 HAT 中生長）。
體外培養(yǎng)體系中，P3X63-Ag8.653 細胞展現(xiàn)出穩(wěn)定的懸浮增殖能力與du特的代謝特征。最適培養(yǎng)條件為含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)基，添加 1% 青mei素 - 鏈mei素，在 37℃、5% CO?環(huán)境下，傳代周期約 48 小時，倍增時間約 36 小時，對數(shù)生長期細胞活力達 95% 以上。其顯著特點是無抗體分泌能力（與親本 MOPC-21 不同），這一特性避免了融合后雜交瘤抗體的污染，使單克隆抗體制備更簡便。代謝分析顯示，細胞主要依賴糖酵解供能，葡萄糖消耗速率是正常漿細胞的 2 倍，乳酸分泌量增加 3 倍，這種 Warburg 效應(yīng)使其在缺氧環(huán)境下仍能高效增殖（缺氧條件下存活率達 85%）。軟瓊脂克隆形成率達 50%，克隆形態(tài)呈圓形，邊緣整齊，連續(xù)傳代 60 次后，CD138 表達及 HGPRT 缺陷特性無明顯改變，凍存復(fù)蘇存活率超 90%。
在動物模型中，該細胞系的成瘤模式模擬人類骨髓瘤的骨髓浸潤特性。將 1×10?個細胞腹腔注射 BALB/c 小鼠，10 天形成腹水（腹水量 5-8mL），20 天骨髓浸潤率達 80%，表現(xiàn)為骨髓內(nèi)漿細胞異常增生，擠壓正常造血組織，外周血中可見少量瘤細胞（漿細胞白血病特征）。病理切片顯示骨髓內(nèi)大量 CD138 陽性細胞彌漫浸潤，破壞造血微環(huán)境，免疫組化可見 κ 輕鏈單克隆表達（與親本一致），脾臟和肝臟亦可見漿細胞浸潤灶。與其他骨髓瘤模型相比，其更易形成腹水和骨髓浸潤，成瘤率 100%，生存期約 30 天，適合評估抗骨髓瘤藥物的體內(nèi)療效。
發(fā)病機制研究揭示其te有的分子異常。基因測序顯示，細胞存在 NRAS 基因第 61 密碼子突變（Q61L）和 IGH 基因與 MYC 基因易位（t (8;14)），導(dǎo)致 RAS/RAF/MEK 通路持續(xù)激活和 MYC 癌基因過表達。Western blot 檢測顯示磷酸化 ERK（p-ERK）水平是正常漿細胞的 7 倍，MYC 蛋白表達量增加 5 倍，雙靶點抑制（MEK 抑制劑 + MYC 抑制劑）可使細胞增殖率下降 80%，顯著優(yōu)于單靶點抑制。與其他骨髓瘤細胞系相比，其 NF-κB 通路活性較低（p65 磷酸化水平僅為其他細胞的 50%），這一特性使其對 NF-κB 抑制劑敏感性較低，為研究不同分子亞型骨髓瘤提供了模型。
在雜交瘤技術(shù)應(yīng)用中，P3X63-Ag8.653 是最chang用的融合親本之一。融合實驗顯示，其與免疫小鼠脾細胞的融合率達 3×10??（每 10?個細胞形成 300 個雜交瘤克隆），顯著高于其他骨髓瘤細胞系（如 SP2/0 的融合率為 1×10??）。融合后的雜交瘤細胞保留了該細胞系的增殖能力和脾細胞的抗體分泌能力，經(jīng) HAT 篩選后，陽性克隆率達 80%，且抗體分泌穩(wěn)定性高（連續(xù)培養(yǎng) 3 個月無明顯下降）。利用該細胞系已成功制備抗 CD3、抗 TNF-α 等數(shù)百種單克隆抗體，在疾病診斷和治療中廣泛應(yīng)用。
藥物篩選研究中，該細胞系是評估抗骨髓瘤藥物的經(jīng)典模型。基于其 NRAS 突變特性，對 MEK 抑制劑敏感，半數(shù)抑制濃度（IC50）約 0.6μM，藥物處理后細胞凋亡率達 50%，Caspase-3 活性上調(diào) 4 倍。體內(nèi)實驗顯示，MEK 抑制劑腹腔注射可使腹水瘤小鼠的生存期延長 40%，腹水量減少 60%。因其 HGPRT 缺陷，還可用于嘌呤類似物藥物的篩選，6 - 巰基嘌呤對其 IC50 約 1μM，顯著低于正常細胞（IC50 10μM），證實其對嘌呤代謝藥物的敏感性。
腫瘤微環(huán)境研究揭示其與骨髓基質(zhì)細胞的相互作用。共培養(yǎng)實驗顯示，骨髓基質(zhì)細胞分泌的 IL-6 可激活該細胞的 STAT3 通路，使 Bcl-2 表達上調(diào) 3 倍，抗凋亡能力增強 60%，IL-6 中和抗體可阻斷這種保護作用。細胞表面高表達黏附分子 VLA-4（α4β1 整合素），可與基質(zhì)細胞的 VCAM-1 結(jié)合，這種黏附作用使細胞對藥物敏感性下降 50%，VLA-4 拮抗劑可恢復(fù)其藥物敏感性。
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