P3/NSI/1-Ag4-1小鼠骨髓瘤細胞系
P3/NSI/1-Ag4-1小鼠骨髓瘤細胞系源自 BALB/c 小鼠的漿細胞瘤，是雜交瘤技術中構建單克隆抗體的 “黃金搭檔"。作為次黃piao呤 - 鳥piao呤磷酸核糖轉移酶缺陷型（HGPRT?）細胞，其因無法自主合成嘌呤核苷酸且不分泌抗體的特性，成為融合脾細胞的理想伴侶，為單克隆抗體制備奠定了關鍵基礎。
顯微鏡下，該細胞呈典型懸浮生長，形態以圓形和橢圓形為主，如同在培養基中自由漂浮的 “小液滴"。細胞直徑約 12-15 微米，略大于普通淋巴細胞；胞質豐富，因富含核糖體而呈強嗜堿性，部分細胞可見空泡結構；核大而圓，位于細胞中央，核質比高達 1:1，染色質疏松，核仁明顯且數量較多（2-4 個），彰顯出旺盛的增殖活性。細胞倍增時間約 24-36 小時，當密度達到 2×10?-3×10?個 / 毫升時需傳代，傳代時無需yi酶消化，僅需輕柔吹打使細胞團分散，按 1:4-1:6 的比例接種至新培養基，連續傳代 50 次以上仍能保持穩定的生物學特性。
培養 P3/NSI/1-Ag4-1 細胞的核心在于模擬漿細胞的生長微環境?；A培養基shou選 RPMI 1640，其含有的谷an酰胺、丙酮酸可滿足細胞高速代謝需求；添加 10% 熱滅活胎牛血清（FBS）提供生長因子，血清中含有的白細胞介素 - 6（IL-6）等細胞因子，對維持骨髓瘤細胞的增殖至關重要。培養環境需嚴格控制在 37℃、5% CO?的恒溫培養箱中，pH 值穩定在 7.2-7.4，通過培養基中的酚紅指示劑可直觀監測酸堿變化。特別注意，該細胞對血清質量極為敏感，劣質血清會導致細胞聚集成團、增殖停滯，因此每批血清需經至少 3 代培養驗證，確保細胞存活率≥90%。
作為雜交瘤技術的核心工具細胞，其 HGPRT?缺陷型是實現選擇性篩選的關鍵。在單克隆抗體制備中，將免疫小鼠的脾細胞與該骨髓瘤細胞融合后，混合體系中存在三種細胞：未融合的脾細胞（體外存活僅 3-5 天）、未融合的骨髓瘤細胞、融合后的雜交瘤細胞。通過 HAT 選擇培養基（含次黃piao呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶），可特異性淘汰未融合的骨髓瘤細胞 —— 因 HGPRT 缺陷，骨髓瘤細胞無法利用次黃piao呤合成嘌呤，而氨基蝶呤阻斷了從頭合成途徑，最終因核苷酸匱乏死亡；雜交瘤細胞則因獲得脾細胞的 HGPRT 基因，可在 HAT 培養基中存活并增殖，這一篩選機制使雜交瘤細胞的獲得效率提升 10-20 倍。
在單克隆抗體優化研究中，該細胞系可用于探索融合效率的影響因素。例如，通過調整聚乙二醇（PEG）濃度（常用 50% PEG 1500）、融合時間（1-2 分鐘）及細胞比例（脾細胞：骨髓瘤細胞 = 5:1-10:1），可將融合率從 10??提升至 10?3，顯著提高陽性克隆的篩選效率。同時，其不分泌抗體的特性避免了雜交瘤細胞產生 “混合抗體"，確保單克隆抗體的均一性，這也是其優于 SP2/0-Ag14 等其他骨髓瘤細胞系的核心優勢。
在抗體藥物研發中，該細胞系構建的雜交瘤可穩定分泌特異性抗體，為單克隆抗體的人源化改造提供原始模板。例如，抗 PD-1 單克隆抗體的早期研發中，通過該細胞系與免疫小鼠脾細胞融合，獲得的雜交瘤細胞分泌的抗體可特異性結合 PD-1 蛋白，經測序后進行人源化改造，最終開發出用于腫瘤免yi治療的臨床藥物。此外，該細胞系可用于研究抗體的糖基化修飾，其分泌的抗體糖型與人類漿細胞存在一定相似性，為優化抗體的效應功能（如 ADCC、CDC）提供實驗依據。
在骨髓瘤病理機制研究中，該細胞系可模擬多發性骨髓瘤的部分病理特征。通過檢測細胞分泌的細胞因子（如 IL-6、TNF-α）及基質金屬蛋白酶（MMPs），可探索骨髓瘤細胞與骨髓微環境的相互作用。例如，該細胞與骨髓基質細胞共培養時，IL-6 分泌量增加 2-3 倍，進而促進自身增殖，形成 “自分泌 - 旁分泌" 惡性循環，這一機制為開發 IL-6 受體拮抗劑提供了直接證據。
前沿研究中，該細胞系的應用持續拓展。在 CRISPR 基因編輯輔助下，通過敲除免疫球蛋白恒定區基因，可構建 “空載體" 骨髓瘤細胞，使雜交瘤分泌的抗體僅含可變區，便于后續的人源化改造；在單細胞測序技術中，對其與脾細胞融合后的雜交瘤進行單細胞轉錄組分析，可揭示抗體親和力成熟的分子機制，為篩選高親和力抗體提供新策略。
以上信息僅供參考，詳細信息請聯系我們。
詳細介紹
產品咨詢
聯系我們
