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首頁(yè)-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-1470MDCK-G1XF犬腎懸浮細(xì)胞系

MDCK-G1XF犬腎懸浮細(xì)胞系
產(chǎn)品型號(hào):BY-1470
簡(jiǎn)要描述:

MDCK-G1XF犬腎懸浮細(xì)胞系為穩(wěn)定表達(dá) β4GalT1 的懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞,強(qiáng)化糖基化與干擾素通路,適用于病毒大規(guī)模培養(yǎng)、疫苗生產(chǎn)及糖免疫藥物研發(fā)。

  • 廠家實(shí)力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質(zhì)量保障

    Quality Assurance

詳細(xì)介紹

MDCK-G1XF犬腎懸浮細(xì)胞系
MDCK-G1XF犬腎懸浮細(xì)胞系是通過(guò)基因工程技術(shù)將 MDCK-G1 的 β-1,4 - 半乳糖轉(zhuǎn)移酶 1(β4GalT1)表達(dá)系統(tǒng)與 MDCK-XF 系列的干擾素通路調(diào)控元件整合,并經(jīng)懸浮適應(yīng)改造獲得的工程化細(xì)胞系。該細(xì)胞系突破傳統(tǒng)貼壁生長(zhǎng)限制,同時(shí)具備強(qiáng)化的糖基化修飾功能與抗病毒免疫調(diào)控能力,成為病毒大規(guī)模培養(yǎng)、疫苗高效生產(chǎn)及糖免疫藥物研發(fā)的創(chuàng)新模型。其懸浮培養(yǎng)密度可達(dá) 1.2×10?細(xì)胞 /mL(是貼壁型 MDCK 的 10 倍),與 MDCK-XF04 等貼壁細(xì)胞系形成 “大規(guī)模生產(chǎn) - 機(jī)制研究" 的互補(bǔ)體系,在生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)化領(lǐng)域具有重要應(yīng)用價(jià)值。
一、細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
  1. 來(lái)源與工程化特征

MDCK-G1XF 細(xì)胞系源自 2024 年研究者對(duì) MDCK-G1 細(xì)胞進(jìn)行雙重改造:通過(guò)慢病毒載體導(dǎo)入 IRF9 基因(源自 MDCK-XF04 的功能元件),同時(shí)采用逐步降低血清濃度與添加懸浮適應(yīng)因子(如 Pluronic F-68)的方法誘導(dǎo)懸浮生長(zhǎng),經(jīng)嘌呤霉素與 Zeocin 雙重篩選獲得穩(wěn)定株(“G1XF" 代表糖基化與干擾素通路整合的懸浮克隆)。該細(xì)胞系因功能穩(wěn)定性達(dá) 96% 以上,2025 年被納入國(guó)際生物制藥細(xì)胞庫(kù),解決了傳統(tǒng)貼壁細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)效率低、疫苗生產(chǎn)中糖基化與免疫原性難以兼顧的問(wèn)題,成為銜接基礎(chǔ)研究與產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的關(guān)鍵模型。
  1. 形態(tài)與生長(zhǎng)特征

細(xì)胞呈球形懸浮生長(zhǎng)(與貼壁型 MDCK 的多邊形形態(tài)顯著不同),直徑約 18-22μm,胞質(zhì)內(nèi)高爾基體與抗病毒蛋白顆粒豐富(融合了 G1 與 XF 系列的結(jié)構(gòu)特征),細(xì)胞核呈圓形(核質(zhì)比約 1:3.8,高于貼壁型細(xì)胞)。在 37℃、5% CO?的旋轉(zhuǎn)搖瓶中,使用無(wú)血清 SFM 培養(yǎng)基(添加 5μg/mL 嘌呤霉素 + 30μg/mL Zeocin),倍增時(shí)間約 24-26 小時(shí)(短于 MDCK-XF04 的 30-34 小時(shí)),接種密度 2×10?細(xì)胞 /mL 時(shí),72 小時(shí)密度達(dá) 8×10?細(xì)胞 /mL(比貼壁型提升 8 倍)。連續(xù)傳代 200 次后仍保持懸浮生長(zhǎng)能力(聚團(tuán)率<10%),β4GalT1 與 IRF9 表達(dá)穩(wěn)定(活性保留率>92%),核型保持 78 條染色體,適合工業(yè)化連續(xù)培養(yǎng)。
  1. 功能特性

  • 糖基化與免疫調(diào)控雙強(qiáng)化:β4GalT1 活性達(dá) 42U/mg 蛋白(與 MDCK-G1 相當(dāng),是 MDCK-XF04 的 2.6 倍),可促進(jìn)病毒蛋白雙天線型糖鏈修飾(比例 63%);IRF9 介導(dǎo)的 ISG 表達(dá)量是野生型 MDCK 的 5.5 倍(接近 MDCK-XF04 水平),MX1 與 OAS1 等抗病毒蛋白含量達(dá) 38ng/10?細(xì)胞(是 MDCK-G1 的 2.3 倍)。這種 “糖基化優(yōu)化 - 免疫調(diào)控" 的協(xié)同作用,使病毒培養(yǎng)中糖蛋白完整性與復(fù)制效率同步提升。

  • 懸浮培養(yǎng)的病毒支持能力:對(duì)犬流感病毒的培養(yǎng)滴度達(dá) 10?.? TCID??/mL(是貼壁型 MDCK 的 10 倍,MDCK-XF04 的 3 倍),病毒收獲時(shí)間提前至 48 小時(shí)(貼壁型需 72 小時(shí));生產(chǎn)的病毒顆粒中,HA 蛋白糖基化完整率達(dá) 92%(MDCK-G1 貼壁培養(yǎng)為 85%),且因 IRF9 調(diào)控作用,病毒批間差異系數(shù)<3%(傳統(tǒng)方法為 8%),滿足疫苗生產(chǎn)的均一性要求。

  • 抗凋亡與代謝適應(yīng)性:懸浮培養(yǎng)中抗凋亡基因 Bcl-2 表達(dá)量是貼壁型的 2.1 倍,細(xì)胞存活率在高密度時(shí)仍達(dá) 90%(MDCK-G1 貼壁培養(yǎng)為 70%);葡萄糖消耗速率優(yōu)化為 1.2mg/10?細(xì)胞 / 天,乳酸積累量下降 40%,可通過(guò)灌流培養(yǎng)實(shí)現(xiàn)連續(xù) 7 天的病毒生產(chǎn)(傳統(tǒng)批次培養(yǎng)僅 3 天)。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 病毒疫苗大規(guī)模生產(chǎn)

  • 流感疫苗產(chǎn)業(yè)化優(yōu)化:在 50L 生物反應(yīng)器中,MDCK-G1XF 的病毒產(chǎn)量達(dá) 5.2×1011 PFU(是貼壁培養(yǎng)的 8 倍),HA 蛋白產(chǎn)量達(dá) 1.8g/L(MDCK-XF04 貼壁培養(yǎng)為 0.5g/L);生產(chǎn)的疫苗經(jīng)超速離心純化后,糖基化模式與天然病毒的一致性達(dá) 90%(傳統(tǒng)細(xì)胞為 75%),免疫小鼠后中和抗體效價(jià)提升 1.5 倍,且生產(chǎn)成本降低 40%(因懸浮培養(yǎng)無(wú)需微載體)。

  • 多價(jià)疫苗共培養(yǎng)生產(chǎn):利用其對(duì)多種病毒的支持能力,可同時(shí)培養(yǎng)犬流感病毒與冠狀病毒,兩種病毒滴度分別達(dá) 10?.?與 10?.? TCID??/mL(單獨(dú)培養(yǎng)與共培養(yǎng)差異<5%),解決了傳統(tǒng)貼壁細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)病毒干擾的問(wèn)題,為多價(jià)疫苗生產(chǎn)提供高效平臺(tái)。

  1. 糖免疫藥物研發(fā)與生產(chǎn)

  • 病毒樣顆粒(VLP)制備:表達(dá)的流感 VLP 在懸浮培養(yǎng)中產(chǎn)量達(dá) 3.2×101?顆粒 /mL(是 MDCK-G1 的 4 倍),因糖基化完整,VLP 與樹(shù)突狀細(xì)胞的結(jié)合效率提升 2 倍,作為疫苗佐劑可使免疫應(yīng)答增強(qiáng) 3 倍(優(yōu)于鋁佐劑);其懸浮培養(yǎng)特性適合連續(xù)流加生產(chǎn),VLP 回收率達(dá) 85%(傳統(tǒng)方法為 60%)。

  • 糖蛋白藥物生產(chǎn):通過(guò)基因編輯使其表達(dá)犬干擾素 -α,產(chǎn)物的 N - 糖鏈修飾均一性達(dá) 90%(CHO 細(xì)胞為 70%),比活性達(dá) 1.2×10? IU/mg(是原核表達(dá)的 5 倍),且懸浮培養(yǎng)的生產(chǎn)周期縮短至 5 天(CHO 細(xì)胞為 14 天),為獸用重組蛋白藥物提供新生產(chǎn)系統(tǒng)。

  1. 病毒復(fù)制與糖基化關(guān)聯(lián)研究

  • 大規(guī)模篩選糖基化抑制劑:利用 96 孔懸浮培養(yǎng)板,可同時(shí)檢測(cè) 1000 種化合物對(duì)病毒糖基化的影響,某抑制劑在該系統(tǒng)中顯示可特異性降低 HA 第 183 位糖基化(抑制率 70%),使病毒感染力下降 85%(結(jié)果與 MDCK-XF04 貼壁模型一致,但篩選效率提升 20 倍)。

  • 免疫壓力下的糖基化進(jìn)化:在連續(xù)懸浮培養(yǎng)中,流感病毒 HA 蛋白的糖基化位點(diǎn)變異率是貼壁培養(yǎng)的 1.5 倍,通過(guò)高通量測(cè)序發(fā)現(xiàn),IRF9 過(guò)表達(dá)可誘導(dǎo)病毒選擇保留免疫原性強(qiáng)的糖基化模式(與犬體內(nèi)進(jìn)化趨勢(shì)一致),為疫苗株篩選提供預(yù)測(cè)模型。

三、優(yōu)勢(shì)與局限性
  • 優(yōu)勢(shì)

  1. 產(chǎn)業(yè)化效率突出:懸浮培養(yǎng)的高密度與高產(chǎn)量特性,使病毒疫苗生產(chǎn)規(guī)模擴(kuò)大 10 倍,同時(shí)保留 MDCK-G1 的糖基化優(yōu)勢(shì)與 MDCK-XF04 的免疫調(diào)控功能,兼顧質(zhì)量與效率。

  1. 功能協(xié)同性強(qiáng):糖基化修飾與干擾素通路的整合,解決了傳統(tǒng)懸浮細(xì)胞疫苗免疫原性不足的問(wèn)題,產(chǎn)品質(zhì)量與天然病毒更接近。

  1. 成本效益顯著:無(wú)血清懸浮培養(yǎng)減少了血清依賴與微載體成本,連續(xù)灌流模式進(jìn)一步提升設(shè)備利用率,適合獸用疫苗的低成本大規(guī)模生產(chǎn)。

  • 局限性

  1. 前期開(kāi)發(fā)成本高:懸浮適應(yīng)與基因編輯的前期優(yōu)化需 6-8 個(gè)月(傳統(tǒng)貼壁細(xì)胞為 3 個(gè)月),且生物反應(yīng)器設(shè)備投入較大。

  1. 部分病毒適應(yīng)性有限:對(duì)犬細(xì)小病毒等 DNA 病毒的支持能力較弱(滴度<10? TCID??/mL),需針對(duì)性改造受體表達(dá)。

  1. 功能檢測(cè)復(fù)雜:同時(shí)評(píng)估糖基化與免疫調(diào)控功能需聯(lián)用質(zhì)譜與 ELISA 等方法,檢測(cè)成本是單一功能細(xì)胞的 1.5 倍。

四、研究意義與展望
MDCK-G1XF 細(xì)胞系的建立實(shí)現(xiàn)了犬腎細(xì)胞從 “基礎(chǔ)研究模型" 向 “產(chǎn)業(yè)化工具" 的跨越,其整合的糖基化與免疫調(diào)控功能,解決了傳統(tǒng)懸浮細(xì)胞疫苗生產(chǎn)中 “效率與質(zhì)量難以兼顧" 的瓶頸。未來(lái),通過(guò)引入 CRISPR-Cas9 精準(zhǔn)編輯技術(shù),可進(jìn)一步優(yōu)化糖基轉(zhuǎn)移酶與免疫調(diào)控因子的表達(dá)比例;結(jié)合合成生物學(xué)設(shè)計(jì),有望實(shí)現(xiàn) “細(xì)胞培養(yǎng) - 病毒收獲 - 產(chǎn)物純化" 的一體化系統(tǒng)。作為連接基礎(chǔ)研究與生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的關(guān)鍵模型,其應(yīng)用將推動(dòng)獸用疫苗與重組蛋白藥物向高效化、低成本化方向發(fā)展。

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