BHK/BQS24倉鼠腎細胞系

產品型號：BY-1348

簡要描述：

BHK/BQS24倉鼠腎細胞系，成纖維樣，貼壁生長，含 BQS24 基因元件，可調控特定蛋白表達，適用于病毒學研究、重組蛋白生產及基因功能驗證。

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BHK/BQS24倉鼠腎細胞系

BHK/BQS24倉鼠腎細胞系是經基因工程改造的 BHK 衍生株，通過穩定整合 BQS24 基因調控元件與報告系統，實現特定蛋白的條件性表達，因基因調控精準、病毒敏感性高，成為病毒復制機制研究、重組蛋白可控表達及基因功能驗證的特色模型。其保留 BHK 細胞成纖維樣形態與貼壁生長特性，同時賦予基因表達的時空調控能力，為解析病毒 - 宿主相互作用及蛋白功能提供了可靠工具。

一、細胞來源與基本特性

來源與構建：該細胞系以 BHK-21 倉鼠腎細胞為親本，通過脂質體轉染導入含 BQS24 啟動子、目的基因多克隆位點及新mei素抗性基因的表達載體，經 G418 篩選及單克隆純化獲得穩定株?！癇QS24" 標識其核心調控元件 ——BQS24 啟動子（一種受病毒感染誘導的順式作用元件），可在病毒復制時啟動下游基因表達，實現 “病毒感應 - 基因激活" 的聯動效應。

形態與增殖：體外培養呈典型成纖維樣形態，貼壁生長，細胞呈長梭形，排列疏松，核質比適中，邊界清晰。在 37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 22-28 小時，適應含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基，傳代 60 次以上仍保持穩定生長速率，BQS24 元件活性無明顯衰減，凍存復蘇后存活率超 85%。

功能特征：該細胞系的核心優勢在于 BQS24 啟動子的病毒響應性：在未感染狀態下，下游基因基礎表達量極低（僅為 CMV 啟動子的 1%-3%）；感染水皰性口炎病毒（VSV）、脊髓灰質炎病毒等后，啟動子被快速激活，4-6 小時內報告基因表達量提升 50-100 倍（熒光素酶檢測），且激活強度與病毒滴度呈正相關（線性范圍 102-10? PFU/mL），可作為病毒感染的 “生物傳感器"。

二、核心應用領域

病毒復制機制研究

該細胞系是解析病毒激活宿主基因表達的理想模型。通過將病毒復制相關宿主蛋白（如 eIF4E）克隆至 BQS24 下游，可觀察病毒感染時這些蛋白的動態表達，發現 VSV 感染可通過激活 NF-κB 通路增強 BQS24 活性（啟動子熒光素酶活性提升 3 倍），為病毒利用宿主資源的機制提供實驗依據。在 RNA 病毒研究中，其可追蹤病毒復制周期與宿主基因表達的時序關聯，明確病毒非結構蛋白對 BQS24 啟動子的調控效應。

抗病du藥物篩選

在藥物研發中，該細胞系可用于高通量篩選抑制病毒復制的化合物。通過構建 BQS24-EGFP 報告株，將藥物處理后的感染細胞置于熒光檢測儀中，通過熒光強度變化評估藥物抗病毒活性。例如，在篩選抗 VSV 藥物時，其能快速區分藥物是抑制病毒進入（熒光無變化）還是阻斷復制（熒光減弱），特異性達 90% 以上，且篩選通量適配 96 孔板自動化平臺，大幅縮短候選化合物初篩周期。

重組蛋白可控表達

利用 BQS24 啟動子的誘導特性，該細胞系可實現重組蛋白的病毒誘導型表達，尤其適合毒性蛋白的生產。將凋亡相關蛋白 Bax 克隆至表達載體后，未誘導時細胞正常增殖，感染低滴度病毒后 Bax 表達量隨時間遞增（24 小時達峰值），凋亡率達 60%-70%，且誘導過程可逆（抗病du藥物處理后表達回落），為毒性蛋白功能研究提供可控系統。

三、培養方法

貼壁培養操作：

復蘇：從液氮取出凍存管，37℃水浴 1-2 分鐘解凍，轉移至含 10mL 預熱培養基（DMEM+10% 胎牛血清 + 500μg/mL G418）的離心管，1000rpm 離心 5 分鐘，重懸后接種至 T25 培養瓶，37℃、5% CO?培養箱靜置培養。

換液：接種 24 小時后首ci換液，去除未貼壁細胞，此后每 48 小時換液一次，維持細胞密度在 30%-70%（避免過度融合影響活性）。

傳代：當細胞融合度達 80% 時，棄培養基，PBS 清洗 2 次，加入 1mL 0.25% yi酶 - EDTA，37℃孵育 2 分鐘，鏡檢細胞脫落后加入 5mL 培養基終止消化，1000rpm 離心 5 分鐘，按 1:3 比例傳代至新培養瓶。

病毒誘導實驗處理：

實驗前 12 小時更換無抗性培養基，按 MOI=0.1-1 接種目標病毒，37℃孵育 1 小時后更換新鮮培養基，根據實驗需求在 4-24 小時內檢測基因表達；若需終止誘導，可加入對應抗病du藥物（如利ba韋林）。

凍存流程：取對數生長期細胞，1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（70% wan全培養基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 4×10?個 /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜，次日轉移至液氮保存，保存期可達 5 年以上。

四、優勢與局限性

優勢：BQS24 元件響應迅速，病毒感染后 4 小時內即可檢測到信號；基因調控動態范圍寬，適合量化分析；貼壁性能優異，可用于長時程共聚焦成像；對多種 DNA 和 RNA 病毒均有響應，適用范圍廣。

局限性：高滴度病毒感染（MOI＞5）會導致細胞病變，影響后續實驗；部分病毒（如腺病毒）可能不激活 BQS24 啟動子，需提前驗證適配性；長期傳代可能導致 G418 抗性丟失，需定期篩選陽性克隆。

五、研究意義

BHK/BQS24 細胞系的建立為病毒學研究提供了兼具敏感性與可控性的工具，其 “病毒感應 - 基因激活" 特性推動了對病毒復制與宿主響應關系的理解。在基礎研究中，其助力闡明病毒調控宿主基因的分子機制，為發現抗病毒靶點提供線索；在應用領域，其加速了抗病du藥物的篩選與開發進程，尤其對新發突發病毒病的應急研究具有重要價值，同時為重組蛋白的可控表達提供了新型誘導系統，拓展了基因工程細胞的應用場景。

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