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詳細介紹
來源與構建:該細胞系于 1964 年由美國科學家從成年非洲綠猴(Cercopithecus aethiops)腎臟皮質組織中分離建立,經原代培養與傳代馴化后獲得永生化特性,“CV-1" 源自 “Cercopithecus aethiops kidney 1" 的縮寫,明確標識其物種與組織來源。與原代腎細胞相比,其突破了增殖代次限制,可穩定傳代 100 次以上,且保留腎臟上皮細胞向成纖維樣細胞轉型的形態特征,為后續應用奠定基礎。
形態與增殖:體外培養呈典型成纖維樣形態,貼壁生長,細胞呈長梭形,排列規則,邊界清晰,核質比正常。在 37℃、5% CO?條件下,增殖穩定,傳代周期約 48-72 小時,可適應含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基,無需特殊生長因子,傳代過程中形態與增殖速率無明顯變化,凍存復蘇后存活率達 85% 以上,顯著優于原代靈長類細胞。
遺傳特征:核型為靈長類動物典型的二倍體,染色體數目 60 條(2n=60),長期傳代后核型變異率<5%,遺傳背景清晰。其顯著特點是內源性逆轉錄病毒序列整合少,對異源病毒的兼容性高,且細胞膜表面表達多種病毒受體(如 SV40 病毒的 CAR 受體),為病毒入侵與復制提供了適宜的宿主環境。
病毒學基礎研究
疫苗開發與生產
基因功能驗證與載體構建
優勢:遺傳穩定性優異,長期傳代后生物學特性無明顯改變,實驗結果可重復性強;對多種病毒敏感,適用范圍廣,減少實驗中細胞系更換成本;培養條件簡單,貼壁牢固,操作便捷,適合實驗室常規操作與工業化生產;作為靈長類細胞,與人類細胞的親緣關系較近,病毒感染模式更接近人體實際情況,研究結果轉化價值高。
局限性:成纖維樣形態使其無法wan全模擬腎臟上皮細胞的生理功能,部分腎臟特異性病毒的研究需結合原代上皮細胞;對某些人類病毒(如丙肝病毒)敏感性低,應用范圍存在局限;長期培養易出現細胞老化現象,傳代超過 150 代后增殖速率明顯下降,需定期凍存保種。
培養條件:常規使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基,添加青mei素 - 鏈mei素混合液預防污染,37℃、5% CO?培養箱中生長良好。傳代時控制融合度在 70%-80%,采用 0.25% yi酶 - EDTA 消化 2-3 分鐘,避免過度消化導致細胞損傷。傳代比例建議 1:3-1:5,每 3-4 天傳代一次,維持細胞處于對數生長期。
質控與安全:定期通過 STR 鑒定確認細胞身份,排除交叉污染;支原體檢測需為陰性,確保實驗準確性。凍存時使用含 10% DMSO 的wan全培養基,梯度降溫后保存于液氮中,復蘇時 37℃水浴快速解凍,離心去除 DMSO 后重懸培養,傳代 1 次后即可用于實驗。因涉及病毒操作,需根據病毒危害等級在相應生物安全實驗室進行,避免生物安全風險。
CV-1 細胞系的建立是靈長類動物細胞培養技術的重要里程碑,其在病毒學研究中的應用已持續近 60 年,支撐了 SV40 病毒致癌機制、痘苗病毒減毒等重大發現,推動了病毒學理論體系的完善。在應用領域,其作為疫苗生產基質,為多種傳染病防控做出了重要貢獻。隨著基因編輯技術的應用(如敲除內源限制因子),該細胞系的病毒敏感性將進一步拓展,在新型病毒研究與基因治療載體開發中持續發揮關鍵作用,成為連接基礎研究與產業化應用的重要橋梁。
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