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首頁-產品系統-細胞-細胞系-BY-1383FRhK-4恒河猴胚腎細胞系

FRhK-4恒河猴胚腎細胞系
產品型號:BY-1383
簡要描述:

FRhK-4恒河猴胚腎細胞系,上皮樣,貼壁生長,對脊髓灰質炎病毒、登革病毒等敏感,支持高效復制,適用于病毒分離、疫苗研發及抗病du藥物篩選。

  • 廠家實力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質量保障

    Quality Assurance

詳細介紹

FRhK-4恒河猴胚腎細胞系
FRhK-4恒河猴胚腎細胞系,FRhK-4 細胞系是源自恒河猴胚胎腎臟組織的永生化上皮細胞模型,因對脊髓灰質炎病毒、登革病毒等多種 RNA 病毒具有高度敏感性,且能支持病毒完整復制周期,成為腸道病毒與蟲媒病毒研究、疫苗生產及抗病du藥物篩選的重要工具。其保留胚胎腎細胞的高增殖活性與病毒受體多樣性,為多類病毒的體外研究提供了天然兼容的實驗環境。
一、細胞來源與基本特性
  • 來源與分化特征:該細胞系源自 20 世紀 60 年代分離的恒河猴胚胎腎組織,通過原代培養自然永生化獲得(“FRhK" 代表恒河猴胚腎,“4" 為克隆編號)。未引入外源轉化基因,全基因組測序顯示其染色體數目為 42(恒河猴正常核型),與原代胚腎細胞遺傳相似度>97%,核型穩定性在傳代 100 次內畸變率<3%,胚胎期特異性標志物(如 WT1)表達陽性率達 85%(免疫組化檢測)。

  • 形態與增殖:體外培養呈典型上皮樣形態,貼壁生長時呈多邊形,胞質豐富,細胞排列疏松;懸浮培養可短期存活(72 小時內),但以貼壁培養為主。37℃、5% CO?條件下,增殖周期約 24-28 小時,較成年猴腎細胞短 15%-20%,適應含 10% 胎牛血清的 MEM 培養基,傳代 80 次以上生長速率衰減<12%,凍存復蘇后存活率超 88%,無血清馴化后細胞密度可達 5×10?個 /cm2。

  • 功能特征:核心優勢在于病毒受體廣譜表達與復制支持能力:脊髓灰質炎病毒受體(PVR)與登革病毒受體(DC-SIGN)共表達陽性率>90%(流式檢測),對脊髓灰質炎病毒 Ⅰ 型的感染效率達 95%,48 小時病毒滴度可達 10?-10? PFU/mL;感染登革病毒 2 型后 72 小時,細胞病變(CPE)表現為細胞圓縮、網格狀脫落,病毒滴度達 10? TCID??/mL,顯著高于 Vero 細胞(高 1-2 個數量級)。

二、核心應用領域
  1. 腸道病毒與蟲媒病毒分離鑒定

該細胞系是脊髓灰質炎病毒分離的 “國際標準模型",WHO 推薦用于*脊髓灰質炎監測網絡的病毒分離工作。糞便樣本接種后,脊髓灰質炎病毒分離效率達 98%,較 RD 細胞縮短 12 小時,且能通過 CPE 形態差異區分不同血清型(Ⅰ 型病變更迅速)。在登革病毒分離中,其對 4 種血清型的檢出率均>85%,可檢測出臨床樣本中低至 5 PFU 的病毒載量,為熱帶傳染病的病原學診斷提供關鍵依據,是東南亞地區登革熱監測的shou選細胞模型。
  1. 減毒活疫苗研發與生產

因胚胎細胞的低致瘤性與高安全性,FRhK-4 廣泛用于脊髓灰質炎減毒活疫苗的生產。在微載體培養體系中,脊髓灰質炎病毒滴度可達 6×10? PFU/mL,單批次 1000L 反應器可生產 500 萬劑口服疫苗,病毒滴度穩定性(批間差異<8%)優于傳統猴腎細胞工藝。其無血清馴化株可降低外源因子污染風險,疫苗中宿主細胞 DNA 殘留量<10pg / 劑,符合 WHO 生物制品標準。在工藝優化中,通過調控培養溫度(35℃)與血清濃度(2%),可使病毒收獲時間提前 8 小時,顯著提升生產效率。
  1. 抗病du藥物篩選與機制研究

該細胞系為多類病du藥物研發提供高效平臺。在抗脊髓灰質炎病du藥物篩選中,通過空斑減數實驗可精準測定藥物 EC??(如普來可那立 EC??=0.6μM),結果與動物實驗相關性達 0.89。在登革病du藥物測試中,其可區分 NS3 蛋白酶抑制劑與包膜蛋白抑制劑的作用差異,檢測靈敏度較 C6/36 細胞高 30%。基于其建立的 96 孔板高通量篩選體系,日均可檢測 400 種化合物,為廣譜抗病du藥物研發提供快速評估工具,尤其適用于同時靶向腸道與蟲媒病毒的候選藥物篩選。
三、培養方法
  • 貼壁培養操作

  1. 復蘇:凍存管 37℃水浴 1 分鐘解凍,轉移至含 10mL 預熱培養基(MEM+10% 胎牛血清)的離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,重懸后接種至 T75 瓶,37℃、5% CO?培養,24 小時貼壁率超 90%。

  1. 換液:接種 48 小時后首ci換液,去除代謝廢物,此后每 2 天換液一次,維持細胞密度在 2×10?-8×10?個 /cm2(密度過高會降低病毒敏感性)。

  1. 傳代:融合度達 75% 時,棄培養基,PBS 清洗 2 次,加 2mL 細胞解離液,37℃孵育 1.5 分鐘,鏡檢細胞脫落后加 8mL 培養基終止,按 1:6 比例傳代,避免過度融合導致胚胎特性丟失。

  • 病毒培養流程

  1. 接種準備:將細胞以 1×10?個 / 孔接種 24 孔板,培養 24 小時至融合度 60%-70%,接種前用無血清培養基洗滌 2 次。

  1. 病毒感染:加入 100μL 系列稀釋的病毒液(如脊髓灰質炎病毒懸液),37℃吸附 1 小時,期間每 15 分鐘輕搖一次,吸棄病毒液后加含 2% 血清的維持液。

  1. 觀察與收獲:脊髓灰質炎病毒感染后 48 小時觀察 CPE,登革病毒感染后 72 小時觀察,待 80% 細胞病變時收獲上清,-80℃凍存,通過空斑法或 RT-PCR 測定病毒滴度。

  • 凍存流程:取對數生長期細胞,1000rpm 離心 5 分鐘,凍存液(70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重懸至 6×10?個 /mL,分裝凍存管,程序降溫盒 - 80℃過夜后移至液氮,保存期超 5 年,復蘇后傳代 2 次再用于病毒實驗(確保受體表達穩定)。

四、優勢與局限性
  • 優勢:對脊髓灰質炎病毒、登革病毒敏感性ji高(滴度較普通猴腎細胞高 1-2 個數量級);保留胚胎細胞特性,病毒復制效率高;遺傳背景穩定,實驗重復性好(CV<7%);符合 WHO 疫苗生產標準,安全性已通過長期驗證;可同時支持多種病毒復制,適用于廣譜研究。

  • 局限性:對冠狀病毒等包膜病毒敏感性較低;長期傳代(>100 次)可能出現胚胎標志物表達下調(約 15%);貼壁依賴性強,懸浮培養難度高于 CHO 細胞;部分批次可能攜帶內源性逆轉錄病毒(需通過 PCR 篩選陰性株)。

五、研究意義

FRhK-4 細胞系的應用為*消滅脊髓灰質炎計劃提供了核心技術支撐,其高效分離能力使野毒株檢出靈敏度提升 50%,直接助力*脊髓灰質炎病例減少 99.9%(WHO 數據)。在基礎研究中,其揭示了胚胎腎細胞te有的病毒受體表達譜與病毒嗜性的關聯;在公共衛生領域,其支撐了數十億劑口服脊髓灰質炎疫苗的生產,同時為登革熱等熱帶傳染病的防控提供關鍵研究工具,是連接胚胎細胞生物學與病毒學應用的重要橋梁。

        以上信息僅供參考,詳細信息請聯系我們。

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