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首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-1458MDCK/IgR犬腎細(xì)胞系

MDCK/IgR犬腎細(xì)胞系
產(chǎn)品型號(hào):BY-1458
簡要描述:

MDCK/IgR犬腎細(xì)胞系為穩(wěn)定表達(dá)免疫球蛋白受體的上皮細(xì)胞系,貼壁生長,可介導(dǎo)抗體轉(zhuǎn)運(yùn),適用于病毒 - 抗體互作、黏膜免疫及藥物轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究。

  • 廠家實(shí)力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質(zhì)量保障

    Quality Assurance

詳細(xì)介紹

MDCK/IgR犬腎細(xì)胞系
MDCK/IgR犬腎細(xì)胞系是通過基因工程技術(shù)在 MDCK (NBL-2) 野生型細(xì)胞基礎(chǔ)上穩(wěn)定表達(dá)免疫球蛋白受體(IgR)的工程化上皮細(xì)胞系,因具備抗體轉(zhuǎn)運(yùn)功能且保留腎臟上皮細(xì)胞特征,對(duì)病毒 - 抗體復(fù)合物的識(shí)別與轉(zhuǎn)運(yùn)效率顯著提升,成為黏膜免疫機(jī)制、病毒中和作用及藥物轉(zhuǎn)運(yùn)研究的重要模型。其表達(dá)的 IgR 與犬源免疫球蛋白的結(jié)合常數(shù)達(dá) 4.6×10?1?M,與野生型 MDCK 細(xì)胞形成 “基因修飾 - 天然對(duì)照" 的研究體系,在病毒中和機(jī)制與抗體藥物開發(fā)中具有du特jia值。
一、細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
  1. 來源與工程化特征

MDCK/IgR 細(xì)胞系源自 2010 年研究者通過慢病毒載體將犬 IgR 基因?qū)?MDCK (NBL-2) 野生型細(xì)胞,經(jīng)嘌呤霉素篩選獲得的穩(wěn)定表達(dá)株(“IgR" 代表免疫球蛋白受體)。該細(xì)胞系因 IgR 表達(dá)穩(wěn)定性達(dá) 95% 以上,2012 年被納入國際細(xì)胞庫,解決了野生型 MDCK 細(xì)胞缺乏功能性 IgR、無法模擬抗體轉(zhuǎn)運(yùn)過程的問題,成為首ge能研究抗體跨上皮轉(zhuǎn)運(yùn)的犬腎細(xì)胞模型。
  1. 形態(tài)與生長特征

細(xì)胞呈上皮樣形態(tài),貼壁生長時(shí)呈多邊形排列(與野生型 MDCK 的 “鋪路石" 狀相似,但邊緣更清晰),胞質(zhì)富含與轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的囊泡結(jié)構(gòu),細(xì)胞核呈橢圓形(核質(zhì)比約 1:4.5,略低于野生型)。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基(添加 5μg/mL 嘌呤霉素維持篩選),倍增時(shí)間約 26-30 小時(shí)(稍長于野生型),接種密度 1×10?個(gè) /mL 時(shí),72 小時(shí)融合度達(dá) 80%(增殖能力略弱于野生型)。連續(xù)傳代 150 次后仍穩(wěn)定表達(dá) IgR(陽性率>90%),核型保持 78 條染色體,功能特性無顯著漂移,適合長期實(shí)驗(yàn)。
  1. 功能特性

  • IgR 表達(dá)與抗體結(jié)合:膜表面 IgR 表達(dá)量達(dá) 6.2×10?分子 / 細(xì)胞(野生型 MDCK 幾乎不表達(dá)),可特異性結(jié)合犬 IgG、IgA(結(jié)合率分別為 98%、85%),對(duì)豬源免疫球蛋白的交叉結(jié)合率約 30%;IgR 介導(dǎo)的抗體內(nèi)吞效率是野生型細(xì)胞的 8 倍,轉(zhuǎn)運(yùn)至基底側(cè)的抗體量達(dá)初始濃度的 45%(野生型<5%),模擬黏膜上皮的抗體轉(zhuǎn)運(yùn)過程。

  • 病毒 - 抗體復(fù)合物處理:對(duì)流感病毒 - 抗體復(fù)合物的捕獲效率達(dá) 90%(野生型為 25%),通過 IgR 介導(dǎo)的內(nèi)吞作用將復(fù)合物轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi),其中 80% 被靶向溶酶體降解(野生型多通過非特異性途徑清除),顯著增強(qiáng)抗體的病毒清除能力;與野生型相比,病毒 - 抗體復(fù)合物處理后細(xì)胞存活率提升 60%。

  • 屏障功能與受體協(xié)同:形成穩(wěn)定的緊密連接,跨上皮電阻(TEER)值達(dá) 300-330Ω?cm2(略低于野生型),保留野生型的唾液酸受體表達(dá)(SAα2,3/SAα2,6 比例 1:1.1),對(duì)流感病毒的感染效率與野生型一致(99%),但在抗體存在時(shí),病毒復(fù)制量下降至野生型的 1/20,體現(xiàn) IgR 與病毒受體的功能協(xié)同。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 黏膜免疫與抗體轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究

  • IgR 介導(dǎo)的抗體轉(zhuǎn)運(yùn)路徑:利用該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn),IgR 通過與抗體 Fc 段結(jié)合,啟動(dòng)網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞(與野生型的非特異性內(nèi)吞不同),轉(zhuǎn)運(yùn)過程依賴 Rab11 陽性 recycling endosome(敲除后轉(zhuǎn)運(yùn)效率下降 75%),與犬腸道黏膜的抗體轉(zhuǎn)運(yùn)規(guī)律wan全一致(R2=0.93),為口服抗體藥物的設(shè)計(jì)提供依據(jù)。

  • 母源抗體傳遞模擬:在幼犬被動(dòng)免疫研究中,MDCK/IgR 細(xì)胞可模擬母乳抗體經(jīng)腎臟重吸收過程,IgA 經(jīng) IgR 轉(zhuǎn)運(yùn)的效率達(dá) 52%,與幼犬血清中母源抗體水平的相關(guān)性達(dá) 91%(野生型細(xì)胞無法模擬),揭示新生動(dòng)物獲得被動(dòng)免疫的關(guān)鍵機(jī)制。

  1. 病毒中和作用與抗體評(píng)價(jià)

  • 抗病毒抗體效能檢測(cè):建立基于 IgR 的抗體中和實(shí)驗(yàn)?zāi)P停晨沽鞲胁《締慰寺】贵w在該細(xì)胞系中表現(xiàn)出的中和效價(jià)是野生型細(xì)胞的 3 倍(EC??=0.05μM),更接近動(dòng)物體內(nèi)保護(hù)效果(相關(guān)性達(dá) 94%),因 IgR 介導(dǎo)的抗體富集作用,可顯著提升低濃度抗體的檢測(cè)靈敏度。

  • 病毒逃逸抗體機(jī)制解析:通過對(duì)比 MDCK/IgR 與野生型細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)某流感病毒變異株可通過改變血凝素構(gòu)象,降低抗體結(jié)合能力,同時(shí)抑制 IgR 介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)清除(效率下降 60%),雙重機(jī)制導(dǎo)致中和逃逸,該發(fā)現(xiàn)為廣譜抗體設(shè)計(jì)提供靶向位點(diǎn)。

  1. 抗體藥物開發(fā)與轉(zhuǎn)運(yùn)研究

  • 口服抗體藥物篩選:利用其抗體轉(zhuǎn)運(yùn)功能,篩選出可被 IgR 高效轉(zhuǎn)運(yùn)的抗 PEDV 單克隆抗體(轉(zhuǎn)運(yùn)效率達(dá) 48%),在仔豬口服實(shí)驗(yàn)中,腸道吸收量是普通抗體的 3 倍,對(duì) PEDV 的抑制率達(dá) 85%,解決了抗體藥物口服生物利用度低的問題。

  • 藥物 - 抗體偶聯(lián)物遞送:將抗病du藥物與 IgG 偶聯(lián),通過 MDCK/IgR 細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng),藥物在基底側(cè)的釋放量是游離藥物的 10 倍,對(duì)感染細(xì)胞的靶向性顯著提升(IC??下降至 0.1μM),減少對(duì)正常細(xì)胞的毒性。

三、優(yōu)勢(shì)與局限性
  • 優(yōu)勢(shì)

  1. 功能特異性突出:具備野生型 MDCK 缺乏的 IgR 介導(dǎo)抗體轉(zhuǎn)運(yùn)功能,可模擬天然黏膜的抗體處理過程,為免疫機(jī)制研究提供專屬模型,彌補(bǔ)野生型細(xì)胞在抗體功能研究中的不足。

  1. 檢測(cè)靈敏度高:對(duì)病毒 - 抗體復(fù)合物的捕獲與轉(zhuǎn)運(yùn)能力,使抗體中和實(shí)驗(yàn)的靈敏度提升 3-5 倍,尤其適合低親和力抗體的效能評(píng)價(jià),結(jié)果與在體實(shí)驗(yàn)相關(guān)性更高。

  1. 與野生型互補(bǔ)性強(qiáng):保留野生型的病毒敏感性與屏障功能,可通過對(duì)比實(shí)驗(yàn)區(qū)分 IgR 依賴與非依賴的生物學(xué)過程,研究設(shè)計(jì)更具科學(xué)性。

  • 局限性

  1. IgR 種屬特異性:主要表達(dá)犬源 IgR,對(duì)人源或豬源抗體的轉(zhuǎn)運(yùn)效率較低(<30%),需構(gòu)建相應(yīng)種屬的 IgR 表達(dá)細(xì)胞系(如 MDCK/pIgR)。

  1. 培養(yǎng)條件復(fù)雜:需持續(xù)添加篩選抗生素,長期培養(yǎng)可能影響細(xì)胞代謝,功能穩(wěn)定性略低于野生型(傳代 150 次后 IgR 表達(dá)下降 10%)。

  1. 功能單一性:僅強(qiáng)化抗體轉(zhuǎn)運(yùn)功能,無法模擬其他免疫細(xì)胞的協(xié)同作用,需與免疫細(xì)胞系聯(lián)合使用。

四、研究意義與展望
MDCK/IgR 細(xì)胞系的建立為抗體轉(zhuǎn)運(yùn)與病毒中和研究提供了精準(zhǔn)工具,其應(yīng)用使黏膜免疫機(jī)制研究的效率提升 40%。未來,通過表達(dá)人 - 犬嵌合 IgR,可拓展其在人類抗體藥物研發(fā)中的應(yīng)用;結(jié)合野生型 MDCK 細(xì)胞,有望構(gòu)建 “抗體轉(zhuǎn)運(yùn) - 病毒感染" 雙通道研究平臺(tái)。作為基因工程細(xì)胞的代表,其與野生型細(xì)胞形成的互補(bǔ)體系,共同推動(dòng)抗病毒抗體開發(fā)與黏膜免疫機(jī)制研究的突破。

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