L-bFGF-5小鼠淋巴瘤細胞系
L-bFGF-5小鼠淋巴瘤細胞系，是研究腫瘤細胞增殖調控、生長因子信號傳導及淋巴瘤發生機制的重要模型，以穩定分泌堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）、懸浮生長特性及腫瘤微環境交互作用的研究價值為核心優勢，在腫瘤學、細胞生物學及分子醫學研究中應用廣泛，為解析淋巴瘤細胞的惡性增殖機制及相關治療靶點提供了可靠實驗工具。
來源與背景：該細胞系源自經基因修飾的小鼠 T 淋巴細胞淋巴瘤，是通過將 bFGF-5 基因導入親本淋巴瘤細胞系后篩選獲得的穩定表達株。bFGF 作為一種多功能生長因子，在正常組織中參與細胞增殖、分化調控，而在腫瘤微環境中常被異常高表達，通過自分泌或旁分泌方式促進腫瘤細胞增殖、血管生成及侵襲轉移。L-bFGF-5 細胞系的建立，模擬了淋巴瘤細胞中 bFGF 異常高表達的病理狀態，填bu了 bFGF 介導的淋巴瘤惡性進展研究模型的空白，因能穩定分泌 bFGF 且可通過調控其表達水平觀察腫瘤表型變化，成為研究 bFGF 信號通路與淋巴瘤關系的經典模型，相關研究文獻已超千篇。
細胞特性：形態上呈圓形或橢圓形，直徑約 9-11μm，懸浮生長，無貼壁能力，單個或呈小簇狀分布，細胞質豐富，可見少量顆粒，細胞核大且核仁明顯，7% 細胞可見分裂相，體現淋巴瘤細胞的惡性增殖特征。核心特性突出：bFGF 分泌高效穩定，分泌量達 35-45pg/10?細胞 / 24h，是親本細胞系的 8-10 倍，且連續傳代 60 次后分泌能力無明顯下降，細胞培養液中 bFGF 濃度穩定在 25ng/ml 左右；自分泌增殖依賴，通過中和抗體阻斷 bFGF 信號后，細胞增殖速率下降 60%，凋亡率升高至 35%，證實其惡性增殖依賴 bFGF 自分泌環路；信號通路激活狀態，高表達 bFGF 受體（FGFR1/2），bFGF 刺激后 10 分鐘內 ERK1/2 和 PI3K/Akt 磷酸化水平升高 6 倍，下游 Cyclin D1 表達量增加 3 倍，wan美模擬 bFGF 介導的促增殖信號傳導。傳代時直接收集細胞懸液，按 1:5-1:7 比例稀釋接種，細胞密度維持在 3×10?-1.5×10?個 /ml，過高會導致細胞活力下降 25%。
培養條件：基礎培養采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養基，添加 1% 雙抗，37℃、5% CO?飽和濕度環境。關鍵培養要點：生長因子調控，無需額外添加外源性 bFGF 即可維持細胞正常增殖，若需增強 bFGF 分泌，可在培養基中添加 100nM 佛波酯，使分泌量提升 40%；血清質量影響，需使用低內毒素血清（<0.2EU/ml），劣質血清會非特異性激活 MAPK 通路，導致細胞增殖異常，存活率下降 30%；污染防控，因懸浮生長特性，需每周檢測支原體，污染后采用專用清除試劑處理，恢復率可達 88%。凍存采用含 10% DMSO 和 20% 胎牛血清的凍存液，程序降溫后液氮保存，復蘇后 48 小時存活率達 85%，bFGF 分泌能力保持穩定。
檢測鑒定：微生物檢測無細菌、真菌及支原體污染，符合實驗細胞標準。流式細胞術分析顯示 CD3?、CD4?，證實 T 淋巴細胞來源；ELISA 檢測證實細胞培養液中 bFGF 濃度顯著高于親本細胞系，Western blot 顯示 bFGF 蛋白表達量升高 8 倍，且 FGFR 磷酸化水平持續激活。功能驗證中，bFGF 中和實驗顯示細胞集落形成數減少 55%，Transwell 實驗證實其侵襲能力下降 40%，驗證 bFGF 對細胞惡性表型的調控作用。染色體核型為近三倍體（眾數 58-62），存在 8 號染色體三體（含 bFGF-5 基因插入位點），與基因修飾后的遺傳學特征一致。
應用領域：在腫瘤增殖機制研究中，通過該細胞系發現 bFGF 通過激活 FGFR-PI3K/Akt 通路維持淋巴瘤細胞的無限增殖，抑制 PI3K 活性可使細胞周期停滯在 G1 期，比例從 30% 升至 65%，為淋巴瘤的靶向治療提供關鍵機制依據。在腫瘤微環境研究中，利用其分泌 bFGF 的特性，證實該因子可促進血管內皮細胞遷移和管腔形成，培養液上清可使內皮細胞管腔形成數增加 2.3 倍，揭示淋巴瘤血管生成的旁分泌調控機制。在藥物篩選方面，作為 bFGF/FGFR 通路抑制劑的評估模型，新型 FGFR 抑制劑可使 L-bFGF-5 細胞增殖抑制率達 70%，IC50 值穩定在 0.8μM 左右。此外，該細胞系可用于研究腫瘤細胞的耐藥機制，發現長期暴露于低劑量抑制劑可誘導 bFGF 分泌量升高 2 倍，通過負反饋增強通路活性，為克服耐藥提供新策略。
與其他淋巴瘤細胞系相比，L-bFGF-5 細胞系的優勢在于其 bFGF 分泌的高穩定性、自分泌增殖環路的明確性及信號通路研究的便捷性，bFGF 依賴的增殖抑制率遠高于普通淋巴瘤細胞系（如 EL4，約 40%）。通過該細胞系的研究，已闡明 8 個 bFGF 下游調控基因，推動 3 種 FGFR 抑制劑進入臨床前試驗，為淋巴瘤的機制研究及治療策略開發提供了重要實驗依據。
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