構建背景：TPO 是調控巨核細胞增殖分化與血小板生成的關鍵細胞因子，該細胞系通過載體介導（如含 CMV 啟動子的表達質粒）將人 TPO 基因導入 CHO 細胞，經(jīng)嘌呤霉素抗性篩選獲得穩(wěn)定分泌株，“I" 代表篩選得到的高表達克隆，確保 TPO 產(chǎn)量的均一性。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)時呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長，細胞呈多邊形，排列緊密，形態(tài)與親本 CHO 細胞一致。在 37℃、5% CO?條件下，傳代周期約 2-3 天，可適應含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基，兼容懸浮培養(yǎng)與無血清體系，高密度培養(yǎng)時（細胞密度達 1×10?個 /mL）仍能保持穩(wěn)定增殖，為大規(guī)模生產(chǎn) TPO 奠定基礎。

表達特征：TPO 主要分泌至細胞外培養(yǎng)基中，表達量可達 5-10μg/（10?細胞?24h），且長期傳代（＞30 代）后分泌量波動＜15%。分泌的 TPO 為糖基化蛋白，分子量約 70kDa（含糖鏈），與天然人 TPO 的結構與活性高度一致，通過 Western blot 可檢測到特異性條帶，且能被 TPO 抗體中和。

優(yōu)勢：TPO 分泌穩(wěn)定，避免重組蛋白表達的批次差異；產(chǎn)物活性高，糖基化修飾與天然 TPO 一致，生物活性（如刺激巨核細胞增殖）是原核表達 TPO 的 3-5 倍；培養(yǎng)適應性強，可通過懸浮培養(yǎng)放大生產(chǎn)，降低大規(guī)模制備成本；分泌型表達便于產(chǎn)物純化，無需裂解細胞，簡化下游處理流程。

局限性：長期培養(yǎng)需維持抗生素篩選壓力（如 2μg/mL 嘌呤霉素），否則易丟失表達質粒；TPO 分泌可能受細胞密度影響，需優(yōu)化培養(yǎng)條件以保持產(chǎn)量穩(wěn)定；作為異源表達系統(tǒng)，其糖基化模式與人類細胞存在細微差異，雖不影響主要活性，但用于臨床級藥物生產(chǎn)時需進一步驗證。

培養(yǎng)條件：基礎培養(yǎng)基為含 10% 胎牛血清、2μg/mL 嘌呤霉素的 DMEM/F12，添加青mei素 - 鏈mei素防污染。傳代時用 0.25% yi酶消化，貼壁培養(yǎng)融合度控制在 60%-80%，避免過度密集導致 TPO 分泌量下降。懸浮培養(yǎng)可采用含 5% 血清的 CDM4CHO 培養(yǎng)基，通過生物反應器實現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)，TPO 產(chǎn)量可達 20-50mg/L。

TPO 活性檢測：推薦使用巨核細胞增殖實驗驗證活性，如將培養(yǎng)上清與 UT-7/TPO 細胞共孵育 48 小時，通過 CCK-8 法檢測細胞活力，活性單位定義為刺激 50% 最大增殖的上清稀釋倍數(shù)，通常比活性＞1×10?U/mg。

凍存與復蘇：凍存液含 10% DMSO、2μg/mL 嘌呤霉素，液氮保存可維持活性 3 年以上；復蘇時 37℃快速解凍，離心后用含篩選壓力的培養(yǎng)基重懸，傳代 2 次后檢測 TPO 分泌量，確保活性穩(wěn)定。