Ca761小鼠乳腺癌瘤株細(xì)胞系
Ca761小鼠乳腺癌瘤株細(xì)胞系源自 615 近交系小鼠的自發(fā)性乳腺癌組織，是具有高成瘤性和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移傾向的乳腺癌模型，在乳腺癌區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移機(jī)制、腫瘤微環(huán)境互作及抗轉(zhuǎn)移藥物篩選中具有du特jia值，為解析乳腺癌局部侵襲與淋巴道播散規(guī)律提供了理想工具。
該細(xì)胞系呈現(xiàn)典型的惡性上皮細(xì)胞形態(tài)與表型特征。顯微鏡下，細(xì)胞呈多邊形或短梭形，貼壁生長為主，排列呈雜亂的片狀，細(xì)胞間連接松散，無極性，細(xì)胞大小差異明顯（直徑 12-22μm），核質(zhì)比高，細(xì)胞核畸形顯著，可見多核及巨核現(xiàn)象，染色質(zhì)粗密呈塊狀，核仁大而清晰（2-3 個），核分裂象多見（每 10 個高倍視野 8-12 個），胞質(zhì)呈弱嗜堿性，含少量脂質(zhì)空泡，電鏡下可見細(xì)胞表面微絨毛增多，橋粒連接減少，反映其上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的部分特征。免疫表型分析顯示，細(xì)胞高表達(dá)乳腺癌相關(guān)標(biāo)志物，如細(xì)胞角蛋白 18（CK18）、粘蛋白 1（MUC1），流式細(xì)胞術(shù)檢測陽性率分別達(dá) 92% 和 88%，同時表達(dá)淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)分子 CCL21 和 CXCR4，其中 CXCR4 在細(xì)胞表面的表達(dá)量較正常乳腺上皮細(xì)胞高 6 倍，為其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移特性提供分子基礎(chǔ)。
體外培養(yǎng)體系中，Ca761 細(xì)胞展現(xiàn)出穩(wěn)定的增殖能力與顯著的淋巴侵襲潛能。最適培養(yǎng)條件為含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)基，在 37℃、5% CO?環(huán)境下，傳代周期約 60 小時，對數(shù)生長期細(xì)胞活力達(dá) 90% 以上，倍增時間約 40 小時，增殖速率略低于 Ca759 細(xì)胞。其顯著特點是具有ji強(qiáng)的體外侵襲能力，Transwell 侵襲實驗中 24 小時穿透基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)是低轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞系的 3 倍，且對淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的黏附率達(dá) 45%（普通乳腺癌細(xì)胞約 20%），這種高黏附特性與其高表達(dá)整合素 α4β7 密切相關(guān)，阻斷該整合素可使黏附率下降 60%。軟瓊脂克隆形成率達(dá) 30%，克隆形態(tài)呈致密團(tuán)塊狀，邊緣有細(xì)長突起，提示其侵襲性生長特征。凍存復(fù)蘇性能良好，液氮凍存后復(fù)蘇存活率超 85%，連續(xù)傳代 45 次后，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)分子表達(dá)及侵襲能力無明顯衰減，保證實驗穩(wěn)定性。
Ca761 細(xì)胞的核心價值體現(xiàn)在其對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程的精準(zhǔn)模擬。在動物模型中，將 1×10?個細(xì)胞接種于 615 小鼠乳腺脂肪墊，14 天形成原發(fā)瘤，28 天同側(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率達(dá) 75%，35 天鎖骨上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率達(dá) 50%，轉(zhuǎn)移灶病理顯示腫瘤細(xì)胞取代淋巴組織，形成與原發(fā)灶相似的結(jié)構(gòu)，且保留 CK18 表達(dá)。通過熒光標(biāo)記細(xì)胞追蹤發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞先侵襲乳腺間質(zhì)，穿透毛細(xì)淋巴管壁（第 18-22 天），在淋巴管內(nèi)形成癌栓，最終定植于淋巴結(jié)皮質(zhì)竇，這一過程與人類乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移的 "侵襲 - 穿透 - 定植" 三階段模式高度一致，為研究淋巴道轉(zhuǎn)移的動態(tài)機(jī)制提供了可視化模型。
在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移機(jī)制研究中，該細(xì)胞系揭示了趨化因子軸的關(guān)鍵作用。細(xì)胞高分泌 CCL2，可招募淋巴結(jié)來源的成纖維細(xì)胞樣網(wǎng)狀細(xì)胞（FRCs），F(xiàn)RCs 分泌的 CCL19 進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移，形成 "腫瘤細(xì)胞 - FRCs" 趨化循環(huán)，Transwell 共培養(yǎng)實驗顯示 FRCs 可使 Ca761 細(xì)胞遷移數(shù)增加 2.5 倍，而 CCL19 中和抗體可阻斷這種促進(jìn)作用。基因沉默 CXCR4 后，細(xì)胞對淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的黏附率下降 55%，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率降至 20%，證實 CXCR4-CXCL12 軸在淋巴定植中的核心作用，Western blot 顯示該軸激活后可上調(diào) MMP-14 表達(dá)，促進(jìn)淋巴管基底膜降解。
在腫瘤微環(huán)境研究中，Ca761 細(xì)胞與淋巴基質(zhì)細(xì)胞的相互作用為解析轉(zhuǎn)移微環(huán)境形成提供了線索。與淋巴結(jié)巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)時，可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化為 M2 型（CD206?比例達(dá) 65%），M2 型巨噬細(xì)胞分泌的 IL-10 可激活腫瘤細(xì)胞的 STAT3 通路，使抗凋亡蛋白 Bcl-2 表達(dá)上調(diào)，凋亡率下降 40%，而清除巨噬細(xì)胞可使裸鼠淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率下降 45%。在缺氧微環(huán)境中（1% O?），細(xì)胞 HIF-1α 表達(dá)上調(diào)，誘導(dǎo) VEGFC 分泌增加，促進(jìn)淋巴管生成，條件培養(yǎng)基可使淋巴內(nèi)皮細(xì)胞管腔形成數(shù)增加 2 倍，VEGFC 抗體處理可抑制這一過程。
在藥物篩選應(yīng)用中，該細(xì)胞系是評估抗淋巴轉(zhuǎn)移藥物的理想模型。體外藥敏實驗顯示，細(xì)胞對多xi他賽的 IC50 為 1.2μM，較 Ca759 細(xì)胞敏感（IC50 1.8μM），聯(lián)合 CXCR4 拮抗劑后，IC50 降至 0.5μM，且 Transwell 侵襲細(xì)胞數(shù)減少 70%。體內(nèi)實驗中，多xi他賽聯(lián)合 CXCR4 拮抗劑可使 615 小鼠腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率從 75% 降至 30%，原發(fā)瘤抑瘤率達(dá) 58%，腫瘤組織中 MMP-14 活性下降 60%，證實靶向聯(lián)合hua療的協(xié)同抗轉(zhuǎn)移作用。某中藥提取物處理后，細(xì)胞 CCL2 分泌量減少 55%，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶數(shù)量下降 40%，顯示其調(diào)節(jié)趨化因子網(wǎng)絡(luò)的潛力。
在激素相關(guān)性研究中，Ca761 細(xì)胞表現(xiàn)出弱雌激素受體（ER）陽性（約 25%），孕激素受體（PR）陰性特征，雌激素處理可使細(xì)胞增殖率提升 20%，但遠(yuǎn)低于 Ca759 細(xì)胞（30%），提示其激素依賴性較低，更適合研究非激素依賴型乳腺癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制。ER 信號通路激活后，CXCR4 表達(dá)上調(diào) 1.8 倍，說明激素信號可能通過調(diào)控轉(zhuǎn)移相關(guān)分子影響淋巴轉(zhuǎn)移進(jìn)程。
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