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首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細胞-細胞系-BY-1401VERO-TB非洲綠猴腎細胞克隆株細胞系

VERO-TB非洲綠猴腎細胞克隆株細胞系
產(chǎn)品型號:BY-1401
簡要描述:

VERO-TB非洲綠猴腎細胞克隆株細胞系,VERO-TB 為非洲綠猴腎細胞 Vero 的克隆株,上皮樣,貼壁生長,對結(jié)核分枝桿菌抗原敏感,適用于結(jié)核診斷試劑研發(fā)、抗結(jié)核藥物篩選及免疫機制研究。

  • 廠家實力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質(zhì)量保障

    Quality Assurance

詳細介紹

VERO-TB非洲綠猴腎細胞克隆株細胞系
VERO-TB非洲綠猴腎細胞克隆株細胞系,VERO-TB 細胞系是非洲綠猴腎 Vero 細胞經(jīng)單克隆篩選獲得的克隆株,因?qū)Y(jié)核分枝桿菌抗原具有高度敏感性,且能穩(wěn)定表達結(jié)核桿菌識別相關(guān)受體,成為結(jié)核診斷試劑研發(fā)、抗結(jié)核藥物篩選及免疫機制研究的特色工具。其保留 Vero 細胞的生物安全性與培養(yǎng)穩(wěn)定性,同時通過克隆純化強化了對分枝桿菌抗原的應(yīng)答特性,為結(jié)核相關(guān)研究提供了標準化實驗?zāi)P汀?/span>
一、細胞起源與生物學特性
  1. 來源與篩選機制

Vero 細胞源自 1962 年分離的非洲綠猴腎細胞,而 VERO-TB 通過有限稀釋法單克隆篩選獲得(“TB" 代表結(jié)核分枝桿菌相關(guān)特性)。篩選過程以結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白 ESAT-6 刺激后的細胞因子(如 IL-6、TNF-α)分泌量為指標,經(jīng) 3 輪篩選獲得高應(yīng)答性克隆株。其高敏感性與 Toll 樣受體 2(TLR2)、TLR4 的高表達相關(guān) —— 這兩種受體可特異性識別分枝桿菌細胞壁成分(如脂阿拉伯甘露聚糖),使細胞對結(jié)核抗原的應(yīng)答強度較親本 Vero 細胞提升 3-4 倍。
  1. 形態(tài)與生長特征

細胞呈典型上皮樣形態(tài),貼壁生長時呈多邊形,排列緊密,胞質(zhì)均勻,核仁清晰,較親本 Vero 細胞形態(tài)更均一(克隆純化特性)。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基,倍增時間約 42-48 小時,傳代比例 1:3 至 1:5,每周換液 2-3 次以維持細胞融合度在 60%-70%(避免過度融合影響受體表達)。細胞凍存復(fù)蘇存活率超 90%,連續(xù)傳代 60 次后對結(jié)核抗原的敏感性無顯著下降,核型分析顯示保留非洲綠猴二倍體特征(2n=60),畸變率<5%,符合生物制品用細胞標準。
  1. 功能特性

  • 受體表達:TLR2 與 TLR4 表達量分別為親本細胞的 2.5 倍和 1.8 倍(qPCR 檢測),表面受體密度達 8×10?分子 / 細胞(流式細胞術(shù)),可高效識別結(jié)核分枝桿菌的脂類與肽聚糖抗原。

  • 免疫應(yīng)答:經(jīng) ESAT-6(5μg/mL)刺激 24 小時后,IL-6 分泌量達 800pg/mL,TNF-α 達 500pg/mL,分別為親本細胞的 3 倍和 2.5 倍,且應(yīng)答閾值低(最di檢測限 0.1μg/mL ESAT-6),優(yōu)于傳統(tǒng)巨噬細胞模型(最di檢測限 1μg/mL)。

  • 生物安全性:無致瘤性(裸鼠接種實驗陰性),外源微生物檢測均為陰性,適合作為診斷試劑生產(chǎn)的細胞基質(zhì)。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 結(jié)核診斷試劑研發(fā)

  • 抗原檢測平臺:利用其對結(jié)核抗原的高敏感性,構(gòu)建夾心 ELISA 檢測體系。例如,以 VERO-TB 細胞裂解液包被微孔板,可捕獲樣本中低至 10pg/mL 的 ESAT-6,較傳統(tǒng) Vero 細胞檢測靈敏度提升 10 倍,對肺結(jié)核患者痰液樣本的檢出率達 92%,特異性>95%,顯著優(yōu)于商用試劑盒(檢出率 85%)。

  • γ- 干擾素釋放實驗(IGRA)優(yōu)化:作為抗原呈遞細胞,可高效激活結(jié)核特異性 T 細胞分泌 IFN-γ。將 VERO-TB 負載 PPD 抗原后與外周血單個核細胞共培養(yǎng),IFN-γ 檢測靈敏度提升 40%,對潛伏性結(jié)核感染的檢出率達 88%,較傳統(tǒng)方法減少假陰性結(jié)果。

  1. 抗結(jié)核藥物篩選與機制研究

  • 藥物活性評估:可用于篩選具有免疫調(diào)節(jié)作用的抗結(jié)核藥物。例如,檢測中藥提取物對 ESAT-6 誘導(dǎo)的 IL-6 分泌的抑制效果,發(fā)現(xiàn)天然活性成分的半數(shù)抑制濃度為 20μM,且對細胞無毒性(半數(shù)毒性濃度>200μM),后續(xù)動物實驗證實其可降低結(jié)核小鼠的肺部炎癥水平,為開發(fā)宿主導(dǎo)向治療藥物提供候選分子。

  • 耐藥機制研究:通過構(gòu)建耐藥結(jié)核分枝桿菌感染模型,發(fā)現(xiàn) VERO-TB 細胞對耐藥株的識別能力下降(細胞因子分泌減少 50%),與耐藥株細胞壁脂阿拉伯甘露聚糖結(jié)構(gòu)改變相關(guān),為解析耐藥菌的免疫逃逸機制提供新線索。

  1. 結(jié)核疫苗免疫原性評估

  • 候選疫苗篩選:可評估疫苗誘導(dǎo)的抗原特異性免疫應(yīng)答。例如,對重組 BCG 疫苗免疫的小鼠血清,通過 VERO-TB 細胞檢測其阻斷 ESAT-6 結(jié)合的能力,中和率達 70% 的疫苗株在動物實驗中顯示出更強的保護力(肺部菌落數(shù)減少 100 倍),為疫苗優(yōu)化提供快速評價工具。

  • 黏膜免疫研究:將 VERO-TB 細胞與支氣管上皮細胞共培養(yǎng)構(gòu)建 3D 模型,可模擬結(jié)核桿菌肺部感染微環(huán)境,評估疫苗誘導(dǎo)的黏膜抗體(如 IgA)的保護效果,發(fā)現(xiàn)分泌型 IgA 可降低結(jié)核桿菌的細胞黏附率 60%,為黏膜疫苗設(shè)計提供依據(jù)。

三、培養(yǎng)與實驗操作要點
  1. 基礎(chǔ)培養(yǎng)方案

  • 培養(yǎng)基:DMEM 高糖培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清,pH 維持在 7.2-7.4,可加入抗感染試劑預(yù)防污染。

  • 傳代流程:當細胞融合度達 70%-80% 時,棄舊培養(yǎng)基,PBS 洗滌 2 次,加入細胞解離液,37℃孵育 3-4 分鐘至細胞脫落,含血清培養(yǎng)基終止消化后按 1:4 比例傳代,避免消化過度影響細胞活性。

  • 凍存保護:取對數(shù)生長期細胞,用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基重懸至密度 1×10?個 /mL,程序降溫后液氮保存,復(fù)蘇時 37℃水浴解凍,離心去除 DMSO,傳代 2 次待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后使用。

  1. 抗原刺激與檢測操作

  • 結(jié)核抗原處理:將 ESAT-6 或 PPD 抗原用無血清培養(yǎng)基稀釋至 0.1-10μg/mL,加入鋪滿 VERO-TB 細胞的 96 孔板(1×10?細胞 / 孔),37℃孵育 24 小時,收集上清檢測細胞因子。

  • 細胞因子檢測:采用 ELISA 試劑盒檢測 IL-6、TNF-α 等,或通過流式細胞術(shù)分析細胞表面 CD80/CD86 的表達變化,評估抗原刺激強度。

四、優(yōu)勢與局限性
  • 優(yōu)勢

  1. 抗原敏感性高:對結(jié)核分枝桿菌抗原的檢測閾值顯著低于親本細胞與傳統(tǒng)免疫細胞模型,適合低濃度抗原樣本的檢測。

  1. 培養(yǎng)穩(wěn)定性好:貼壁生長特性穩(wěn)定,傳代操作簡便,可實現(xiàn)標準化培養(yǎng),批間實驗差異<8%。

  1. 功能多樣性:既可作為檢測平臺,又能用于藥物篩選與疫苗評估,覆蓋結(jié)核研究多個領(lǐng)域。

  • 局限性

  1. 非人源模型限制:作為猴源細胞,其免疫受體與人類存在物種差異(TLR2 同源性 90%),部分研究結(jié)果需在人源細胞中驗證。

  1. 單一克隆特性:對非結(jié)核分枝桿菌(如鳥分枝桿菌)的敏感性較低,應(yīng)用范圍受限。

  1. 血清依賴:無血清培養(yǎng)基中 TLR 表達量下降 20%,影響抗原應(yīng)答效率,增加大規(guī)模培養(yǎng)成本。

五、研究意義與展望
VERO-TB 細胞系的建立為結(jié)核研究提供了高效工具,其在診斷試劑中的應(yīng)用提升了結(jié)核感染的檢出率,尤其對潛伏性感染與耐藥株的識別具有重要價值。在藥物研發(fā)領(lǐng)域,其助力發(fā)現(xiàn)宿主導(dǎo)向治療的新靶點,為解決結(jié)核耐藥問題提供新思路。未來,通過基因編輯技術(shù)引入人源 TLR2/4,可進一步提升模型的臨床相關(guān)性;結(jié)合微流控芯片技術(shù)構(gòu)建 “器官芯片" 模型,有望模擬結(jié)核桿菌在體內(nèi)的感染過程,推動結(jié)核防控技術(shù)的革新。


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