原代細胞培養中zui常用的是分散細胞培養之一。分散細胞培養，即將組織塊用機械法或化學法使細胞分散。如欲從胎兒或新生兒的組織分離到活性的游離細胞，經典的方法是用蛋白水解酶（如胰蛋白酶和膠原酶）消化細胞間的結合物，或用金屬離子螯合劑（如EDTA）除去細胞互相粘著所依賴的Ca2+，再經機械輕度振蕩，使之成為單細胞。

 

 

舉例：神經細胞分散培養實驗-基本技術指南

從神經組織解離到建立原代細胞培養通常需要幾天，甚至數周。這個過程不僅繁瑣， 還很單調。其實還有一種捷徑，幾個小時就能實現從神經組織到體外培養細胞系的產生。 這個無縫的流程讓研究人員充分利用了寶貴的樣品，同時還有寶貴的時間。本文就舉個例 子，說明一下從組織樣品到細胞培養的每一步。

步驟1：神經組織解離 

神經組織的解離是第1步。Neural Tissue Dissociation Kit能夠將胚胎、新 生或成體來源的組織溫和解離成單細胞懸液。兩步的酶解過程只需要不到一個小時，就能 產生大量下游分析即用的活細胞。解離過程可以手工完成，也可自動完成。

解離過 程如下：

將腦組織切成小塊，收集在HBSS中，300×g離心2分鐘 → 加入預熱的酶混 合物1，37°C孵育 → 再加入酶混合物2 → 解離（手工解離或自動解離）→ 加到30 μm 細胞濾器中，用HBSS洗滌兩次

 

步驟2：髓磷脂碎片的去除+神經細胞的分離

獲得了單細胞 懸液之后，下一步就是目的細胞的分離。在細胞分離方面，MACS技術無疑是金標準，目 前發表的文獻已達12000多篇。別急，在細胞分離之前還有一個小插曲。那就是去除對后 續免疫標記有干擾的髓磷脂（myelin）。美天旎zui近推出的Myelin Removal Beads能夠從 神經細胞懸液中去除髓磷脂，標記+分離的全過程只需要35分鐘。

髓磷脂的去除是了為回收率。做過比對實驗，將步驟1得到的細胞懸液分成兩組，一組用 Myelin Removal Beads處理，一組不處理。然后分別從兩組中分離神經前體細胞。*組 （處理過）的回收率達95%，第二組（未處理）只有80%。

 

步驟3：神經細胞培養     分離到了你想要的神經細胞， 下一步就是原代細胞培養了。