TiBC羅非魚腦細(xì)胞系
TiBC羅非魚腦細(xì)胞系作為針對(duì)羅非魚神經(jīng)系統(tǒng)研究的重要細(xì)胞模型，在水產(chǎn)養(yǎng)殖與魚類生物學(xué)領(lǐng)域具有不可替代的價(jià)值。它的建立為探索羅非魚神經(jīng)系統(tǒng)功能、病毒感染機(jī)制及神經(jīng)相關(guān)疾病研究提供了穩(wěn)定的體外模型，推動(dòng)了相關(guān)科研與應(yīng)用的發(fā)展。
羅非魚是熱帶亞熱帶地區(qū)廣泛養(yǎng)殖的淡水魚類，具有生長(zhǎng)迅速、耐低氧、適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)，是全球水產(chǎn)養(yǎng)殖的支柱品種之一。腦部作為魚類神經(jīng)系統(tǒng)的核心，負(fù)責(zé)調(diào)控?cái)z食、繁殖、應(yīng)激反應(yīng)等重要生命活動(dòng)，而腦細(xì)胞的正常功能是維持這些生理過(guò)程的基礎(chǔ)。TiBC 細(xì)胞系源自羅非魚腦組織，尤其富集星形膠質(zhì)細(xì)胞，這類細(xì)胞在神經(jīng)支持、營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)及免疫防御中發(fā)揮關(guān)鍵作用，為研究羅非魚神經(jīng)生物學(xué)特性提供了理想材料。
TiBC 羅非魚腦細(xì)胞系的建立經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的無(wú)菌操作流程。選取健康成年羅非魚，經(jīng)全身消毒后，在超凈工作臺(tái)中解剖分離腦組織，去除腦膜及血管等結(jié)締組織。將腦組zhi剪碎成 1mm3 左右的小塊，用含抗菌成分的緩沖液沖洗 4-5 次以去除血細(xì)胞，隨后加入細(xì)胞分散液處理 25-30 分鐘，使細(xì)胞充分分散。收集細(xì)胞懸液經(jīng) 70μm 濾網(wǎng)過(guò)濾，1000r/min 離心 5 分鐘后，用含 15% 胎牛血清的 L-15 培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，接種于培養(yǎng)瓶中，置于 26℃恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行原代培養(yǎng)。初期每 2 天更換一半培養(yǎng)液，待細(xì)胞匯合度達(dá) 70%-80% 時(shí)進(jìn)行傳代，目前已穩(wěn)定傳代至 45 代以上，細(xì)胞活力保持在 85% 以上。
該細(xì)胞系呈現(xiàn)典型的星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)特征，細(xì)胞體呈多角形或星形，具有多個(gè)細(xì)長(zhǎng)突起，常相互連接形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，貼壁生長(zhǎng)能力強(qiáng)。生長(zhǎng)特性研究表明，TiBC 細(xì)胞在 L-15 培養(yǎng)液中生長(zhǎng)狀態(tài)優(yōu)良，相較于 DMEM 等培養(yǎng)基，細(xì)胞增殖速度提高約 20%；最適培養(yǎng)溫度為 26-28℃，與羅非魚的生理溫度一致；當(dāng)胎牛血清濃度為 10%-12% 時(shí)，細(xì)胞群體倍增時(shí)間最短，約為 60 小時(shí)。傳代至 30 代后，細(xì)胞形態(tài)與增殖速率無(wú)明顯變化，核型分析顯示染色體數(shù)目穩(wěn)定，表明其具有良好的遺傳穩(wěn)定性。
在功能特性方面，TiBC 細(xì)胞系展現(xiàn)出顯著的神經(jīng)細(xì)胞特征。免疫熒光檢測(cè)顯示，細(xì)胞高表達(dá)星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物 GFAP（膠質(zhì)纖維酸性蛋白），進(jìn)一步證實(shí)了其細(xì)胞類型屬性。該細(xì)胞系對(duì)羅非魚神經(jīng)壞死病毒表現(xiàn)出高度敏感性，感染后 24 小時(shí)即可觀察到細(xì)胞變圓、聚集、脫落等典型病變，且病毒滴度隨時(shí)間顯著升高，為研究該病毒的侵染機(jī)制與抗病du藥物篩選提供了高效模型。此外，TiBC 細(xì)胞的外源基因轉(zhuǎn)染效率可達(dá) 35% 以上，通過(guò)轉(zhuǎn)染熒光報(bào)告基因，可清晰觀察到基因在神經(jīng)細(xì)胞中的表達(dá)與定位，適用于神經(jīng)相關(guān)基因的功能研究。
TiBC 羅非魚腦細(xì)胞系在多個(gè)研究領(lǐng)域具有重要應(yīng)用。在神經(jīng)生理學(xué)研究中，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化，揭示了羅非魚應(yīng)對(duì)溫度脅迫時(shí)的神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制；在病毒學(xué)研究中，利用該細(xì)胞系成功分離出羅非魚新型皰疹病毒，并明確了病毒復(fù)制的關(guān)鍵階段；在藥物研發(fā)方面，建立了基于細(xì)胞活性的神經(jīng)保護(hù)藥物篩選模型，已篩選出 3 種具有潛在神經(jīng)保護(hù)作用的天然化合物。
作為首ge穩(wěn)定建立的羅非魚腦細(xì)胞系，TiBC 不僅填bu了羅非魚神經(jīng)細(xì)胞模型的空白，更為魚類神經(jīng)科學(xué)研究提供了重要工具，助力推動(dòng)羅非魚健康養(yǎng)殖與水產(chǎn)動(dòng)物神經(jīng)生物學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展。
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