LMH雞肝癌懸浮細胞系
LMH雞肝癌懸浮細胞系作為針對禽類肝臟惡性腫瘤的特異性細胞模型，在禽類肝癌發(fā)生機制、抗腫瘤藥物篩選及病毒感染研究領(lǐng)域具有重要價值。它的建立為深入探究雞肝癌細胞的增殖規(guī)律、代謝特征以及腫瘤微環(huán)境的交互作用等提供了穩(wěn)定的體外研究平臺，對禽類養(yǎng)殖業(yè)的疾病防控和腫瘤生物學(xué)研究意義重大。
雞肝癌是禽類養(yǎng)殖中常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率雖不及哺乳動物，但一旦發(fā)生便會導(dǎo)致雞群生長停滯、產(chǎn)蛋量驟降，給養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)帶來顯著損失。肝癌細胞的無限增殖、侵襲轉(zhuǎn)移等特性是疾病惡化的關(guān)鍵，而傳統(tǒng)的體內(nèi)研究受倫理限制和操作復(fù)雜性影響，難以精準解析腫瘤發(fā)生的分子機制。因此，建立 LMH 雞肝癌懸浮細胞系，成為揭示禽類肝癌病理過程、開發(fā)有效防治技術(shù)的重要突破口。
LMH 雞肝癌懸浮細胞系的建立經(jīng)過了嚴謹規(guī)范的操作流程。選取自然發(fā)病的肝癌雞肝臟腫瘤組織，在超凈工作臺中去除壞死組織和正常肝實質(zhì)，用含雙抗（氨基糖苷類與 β- 內(nèi)酰胺類抗生素）的磷酸鹽緩沖液反復(fù)沖洗，以清除污染物。將腫瘤組zhi剪碎成 1mm3 左右的小塊，加入含膠原酶和胰dan白酶的細胞分散液，在 37℃條件下振蕩處理 60 分鐘，使細胞充分分散。收集細胞懸液，經(jīng) 70μm 細胞濾網(wǎng)過濾后，1200r/min 離心 8 分鐘，棄上清，用含 15% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)液重懸細胞，接種于無菌搖瓶中，置于 37℃、5% CO?恒溫培養(yǎng)箱中進行懸浮培養(yǎng)。培養(yǎng)初期，每日觀察細胞聚集狀態(tài)，每 24 小時更換一半培養(yǎng)液，待細胞密度達到 1×10?個 /mL 時進行傳代，目前該細胞系已穩(wěn)定傳代至 60 代以上，細胞活力保持在 90% 以上。
該細胞系呈現(xiàn)典型的懸浮生長特性，細胞呈圓形或橢圓形，大小均一，胞質(zhì)飽滿，細胞核大而明顯，多數(shù)細胞單獨懸浮或形成松散的小細胞團。生長特性研究顯示，LMH 細胞在 RPMI-1640 培養(yǎng)液中生長狀態(tài)最佳，相較于 DMEM 培養(yǎng)液，細胞增殖速度提高約 25%；最適培養(yǎng)溫度為 37℃，與禽類體溫相符；當胎牛血清濃度為 15% 時，細胞群體倍增時間最短，約為 36 小時。傳代至 50 代后，細胞形態(tài)和增殖速率無明顯變化，核型分析表明其染色體數(shù)目雖存在異常（呈現(xiàn)亞二倍體特征），但遺傳背景穩(wěn)定，符合腫瘤細胞系的典型特征。
在功能特性方面，LMH 雞肝癌懸浮細胞系展現(xiàn)出豐富的腫瘤細胞功能。流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，細胞高表達肝癌相關(guān)標志物如甲胎蛋白（AFP）、細胞角蛋白 19（CK19），進一步證實其肝癌細胞屬性。該細胞系具有較強的增殖能力和克隆形成能力，軟瓊脂克隆實驗顯示其克隆形成率達 45%，顯著高于正常肝細胞；同時，細胞分泌多種血管內(nèi)皮生長因子（VEGF），模擬腫瘤組織的血管生成過程，這對研究肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移機制具有重要意義。此外，LMH 細胞對禽類常見的肝炎病毒（如雞戊型肝炎病毒）表現(xiàn)出易感性，感染后病毒復(fù)制效率高，為研究病毒與肝癌發(fā)生的關(guān)聯(lián)提供了理想模型。
LMH 雞肝癌懸浮細胞系在多個研究領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。在腫瘤機制研究中，通過轉(zhuǎn)錄組測序鑒定出 12 個禽類肝癌特異性高表達基因，其中 LOC420056 基因的敲除可使細胞增殖速率降低 50%；在藥物篩選方面，利用該細胞系建立了高通量篩選模型，已篩選出 3 種對雞肝癌細胞抑制率超過 80% 的天然化合物；在病毒學(xué)研究中，通過細胞感染實驗揭示了肝炎病毒蛋白與宿主癌基因的相互作用機制。
作為穩(wěn)定可靠的禽類肝癌懸浮細胞模型，LMH 不僅填bu了禽類腫瘤細胞體外研究的空白，更為比較腫瘤學(xué)和禽類疾病防控提供了重要工具，推動了禽類肝癌防治技術(shù)的研發(fā)，對保障禽類養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。
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