GGA-EH家雞胚胎心臟細(xì)胞系
GGA-EH家雞胚胎心臟細(xì)胞系作為針對家雞胚胎心臟組織的特異性細(xì)胞模型，在禽類胚胎心臟發(fā)育機制、心肌功能調(diào)控及心臟疾病研究領(lǐng)域具有重要價值。它的建立為深入探究家雞胚胎心肌細(xì)胞的分化規(guī)律、心臟節(jié)律維持機制以及胚胎期心臟相關(guān)疾病的發(fā)生路徑等提供了穩(wěn)定的體外研究平臺，對禽類心臟疾病防控和胚胎心臟生物學(xué)研究意義重大。
家雞胚胎心臟發(fā)育是一個復(fù)雜且精密的過程，其心臟作為最早形成并發(fā)揮功能的器官之一，對胚胎的存活和發(fā)育至關(guān)重要。心臟的正常發(fā)育涉及心肌細(xì)胞的增殖、分化、遷移以及心臟結(jié)構(gòu)的逐步形成，任何環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常都可能導(dǎo)致先天性心臟病等嚴(yán)重問題。傳統(tǒng)的整體胚胎研究難以細(xì)致觀察心肌細(xì)胞的動態(tài)變化和分子調(diào)控機制，而原代心臟細(xì)胞培養(yǎng)存在傳代受限、穩(wěn)定性不足等問題。因此，建立 GGA-EH 家雞胚胎心臟細(xì)胞系，成為解析禽類胚胎心臟發(fā)育奧秘、推動禽類心臟疾病研究的重要突破口。
GGA-EH 家雞胚胎心臟細(xì)胞系的建立經(jīng)過了嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范的操作流程。選取孵化至 6-8 日齡的健康雞胚，在超凈工作臺中無菌取出胚胎心臟組織，去除心bao膜和周圍結(jié)締組織。將心臟組zhi剪碎成 1mm3 左右的小塊，用含雙抗（青mei素與鏈mei素）的磷酸鹽緩沖液反復(fù)沖洗，以清除血液和雜質(zhì)。加入 0.125% 胰dan白酶 - EDTA 混合液，在 37℃條件下消化 15-20 分鐘，期間每隔 5 分鐘輕輕吹打一次使細(xì)胞分散。收集細(xì)胞懸液，經(jīng) 70μm 細(xì)胞濾網(wǎng)過濾后，1000r/min 離心 5 分鐘，棄上清，用含 15% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，接種于明膠包被的培養(yǎng)瓶中，置于 37℃、5% CO?恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行原代培養(yǎng)。培養(yǎng)初期，每 24 小時更換一次培養(yǎng)液，待細(xì)胞匯合度達(dá) 75% 時進(jìn)行傳代，目前該細(xì)胞系已穩(wěn)定傳代至 45 代以上，細(xì)胞活力保持在 85% 以上。
該細(xì)胞系呈現(xiàn)典型的心肌樣形態(tài)，部分細(xì)胞呈短梭形或多邊形，排列較為密集，胞質(zhì)豐富且有光澤，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，部分細(xì)胞可形成肌管樣結(jié)構(gòu)，具有一定的貼壁生長能力。生長特性研究顯示，GGA-EH 細(xì)胞在 DMEM/F12 培養(yǎng)液中生長狀態(tài)最佳，相較于單純 DMEM 培養(yǎng)液，細(xì)胞增殖速度提高約 18%；最適培養(yǎng)溫度為 37℃，與雞胚心臟發(fā)育的生理溫度相符；當(dāng)胎牛血清濃度為 15% 時，細(xì)胞群體倍增時間最短，約為 52 小時。傳代至 35 代后，細(xì)胞形態(tài)和增殖速率無明顯變化，核型分析表明其染色體數(shù)目穩(wěn)定（保持家雞正常的 78 條染色體），遺傳背景可靠，仍保留心肌細(xì)胞的特性。
在功能特性方面，GGA-EH 家雞胚胎心臟細(xì)胞系展現(xiàn)出豐富的心肌細(xì)胞功能。免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞高表達(dá)心肌細(xì)胞特異性標(biāo)志物如肌球蛋白重鏈（MHC）、心肌肌鈣蛋白 I（cTnI），證實其心肌細(xì)胞屬性。該細(xì)胞系具有自主節(jié)律性搏動能力，在體外培養(yǎng)條件下可觀察到細(xì)胞同步收縮現(xiàn)象，搏動頻率約為 60-80 次 / 分鐘，這對研究心臟節(jié)律的產(chǎn)生和調(diào)控機制具有重要意義。同時，GGA-EH 細(xì)胞在受到缺氧、缺血等刺激時，會表現(xiàn)出心肌細(xì)胞te有的應(yīng)激反應(yīng)，如乳酸脫氫酶釋放增加、心肌酶活性變化等，為研究心臟損傷的病理機制提供了理想模型。此外，該細(xì)胞系對禽類常見的心臟相關(guān)病毒（如禽腺病毒）表現(xiàn)出一定的敏感性，感染后會影響細(xì)胞的搏動功能，為研究病毒與心肌細(xì)胞的相互作用提供了良好材料。
GGA-EH 家雞胚胎心臟細(xì)胞系在多個研究領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。在心臟發(fā)育研究中，通過對該細(xì)胞系進(jìn)行基因沉默實驗，揭示了 Nkx2.5 基因在心肌細(xì)胞分化中的關(guān)鍵調(diào)控作用；在藥物研發(fā)方面，利用該細(xì)胞系評估了多種藥物對心肌細(xì)胞功能的影響，為篩選心臟保護(hù)藥物提供了依據(jù)；在疾病模型研究中，建立了基于該細(xì)胞系的心肌損傷模型，用于探究先天性心臟病的發(fā)病機制。
作為穩(wěn)定可靠的家雞胚胎心臟細(xì)胞模型，GGA-EH 不僅填bu了禽類胚胎心臟細(xì)胞長期體外培養(yǎng)的空白，更為禽類心臟發(fā)育生物學(xué)和心臟疾病研究提供了重要工具，推動了家雞胚胎期心臟疾病防控技術(shù)的發(fā)展，對提升禽類養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康水平和經(jīng)濟效益具有重要意義。
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