LSC羔羊睪丸支持細胞系
LSC羔羊睪丸支持細胞系作為針對羔羊睪丸支持組織的特異性細胞模型，在反芻動物生殖發(fā)育機制、精子發(fā)生調(diào)控及生殖疾病研究領(lǐng)域具有重要價值。它的建立為深入探究羔羊睪丸支持細胞的分化規(guī)律、生精微環(huán)境構(gòu)建以及生殖系統(tǒng)相關(guān)疾病的發(fā)生路徑等提供了穩(wěn)定的體外研究平臺，對羔羊生殖機能調(diào)控和反芻動物繁育研究意義重大。
睪丸支持細胞是睪丸內(nèi)的關(guān)鍵細胞類型，承擔(dān)著營養(yǎng)生殖細胞、構(gòu)建生精小管屏障、分泌生殖相關(guān)因子等重要功能，對精子發(fā)生和雄性生殖機能維持起著決定性作用。羔羊階段是睪丸發(fā)育和生殖機能建立的關(guān)鍵時期，這一階段支持細胞的增殖與分化直接影響成年后的繁殖能力。由于傳統(tǒng)的體內(nèi)研究難以精準(zhǔn)解析支持細胞與生殖細胞的互作機制，且原代支持細胞培養(yǎng)存在傳代受限、穩(wěn)定性不足等問題，因此建立 LSC 羔羊睪丸支持細胞系，成為解析反芻動物生殖發(fā)育奧秘、推動繁育技術(shù)發(fā)展的重要突破口。
LSC 羔羊睪丸支持細胞系的建立經(jīng)過了嚴謹規(guī)范的操作流程。選取健康的新生羔羊，在無菌條件下取出睪丸組織，去除被膜和血管。將睪丸實質(zhì)剪切成 1mm3 左右的小塊，用含雙抗的磷酸鹽緩沖液反復(fù)沖洗，以清除血液和雜質(zhì)。加入細胞分散液，在 37℃條件下處理 40-50 分鐘，期間每隔 10 分鐘輕輕吹打一次使細胞分散。收集細胞懸液，經(jīng) 70μm 細胞濾網(wǎng)過濾后，1200r/min 離心 8 分鐘，棄上清，用含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)液重懸細胞，接種于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃、5% CO?恒溫培養(yǎng)箱中進行原代培養(yǎng)。培養(yǎng)初期，每 24 小時更換一次培養(yǎng)液以去除非貼壁細胞，待細胞匯合度達 75% 時進行傳代，目前該細胞系已穩(wěn)定傳代至 50 代以上，細胞活力保持在 90% 以上。
該細胞系呈現(xiàn)典型的不規(guī)則星形形態(tài)，細胞輪廓清晰，胞體伸展呈多角狀，有多個長短不一的胞質(zhì)突起，相鄰細胞的突起可相互連接形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，細胞核呈圓形或橢圓形，位于細胞中央，具有較強的貼壁生長能力。生長特性研究顯示，LSC 細胞在 DMEM/F12 培養(yǎng)液中生長狀態(tài)最佳，相較于單純 DMEM 培養(yǎng)液，細胞增殖速度提高約 22%；最適培養(yǎng)溫度為 37℃，與哺乳動物體溫相符；當(dāng)胎牛血清濃度為 10% 時，細胞群體倍增時間最短，約為 72 小時。傳代至 40 代后，細胞形態(tài)和增殖速率無明顯變化，核型分析表明其染色體數(shù)目穩(wěn)定（保持羔羊正常的染色體數(shù)目），遺傳背景可靠，仍保留睪丸支持細胞的特性。
在功能特性方面，LSC 羔羊睪丸支持細胞系展現(xiàn)出豐富的生殖細胞功能。免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)，細胞高表達睪丸支持細胞特異性標(biāo)志物如波形蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和 FSH 受體，證實其支持細胞屬性。該細胞系具有分泌雄激素結(jié)合蛋白（ABP）和抑制素的能力，ELISA 檢測顯示培養(yǎng)液中 ABP 濃度可達 25ng/mL，這對維持體外生精微環(huán)境具有重要意義。同時，LSC 細胞在體外可與精原細胞共培養(yǎng)并促進其增殖分化，共培養(yǎng)體系中精原細胞存活率較單獨培養(yǎng)提高 40%，為研究支持細胞與生殖細胞的互作機制提供了理想模型。此外，該細胞系對生殖系統(tǒng)相關(guān)病原體如布魯氏菌表現(xiàn)出一定的敏感性，感染后會出現(xiàn)細胞形態(tài)改變和功能異常，為研究病原體對雄性生殖機能的影響提供了良好材料。
LSC 羔羊睪丸支持細胞系在多個研究領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。在生殖發(fā)育研究中，通過對該細胞系進行基因沉默實驗，揭示了 Kit ligand 基因在精原細胞增殖中的關(guān)鍵調(diào)控作用；在繁育技術(shù)方面，利用該細胞系建立了體外生精模型，為人工輔助生殖技術(shù)提供了新的思路；在獸醫(yī)病理學(xué)研究中，通過細胞損傷模型模擬睪丸炎病理過程，闡明了炎癥因子對支持細胞功能的影響機制。
作為穩(wěn)定可靠的羔羊睪丸支持細胞模型，LSC 不僅填bu了反芻動物睪丸支持細胞長期體外培養(yǎng)的空白，更為反芻動物生殖生物學(xué)及繁育技術(shù)研究提供了重要工具，推動了羔羊生殖機能調(diào)控和優(yōu)良品種培育技術(shù)的發(fā)展，對提升畜牧業(yè)生產(chǎn)效益具有重要意義。
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