來源與構(gòu)建：該細胞系以 CHO-K1 細胞為親本，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法導(dǎo)入含 TIM-4 胞外域（IgV 結(jié)構(gòu)域）與 IgG1 Fc 段的融合基因表達載體，經(jīng)潮霉素抗性篩選及單克隆純化獲得穩(wěn)定株，“TIM-4-Fc" 明確標識其表達的融合蛋白組成。構(gòu)建過程中采用 EF1α 啟動子驅(qū)動表達，結(jié)合分泌信號肽優(yōu)化，使融合蛋白分泌效率提升 25%，90% 以上以可溶性形式存在于培養(yǎng)上清中，便于純化與功能研究。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈上皮樣形態(tài)，可適應(yīng)貼壁與懸浮兩種生長模式，懸浮培養(yǎng)時形成直徑 20-40μm 的松散聚集體，細胞輪廓清晰，活力長期維持在 90% 以上。在 37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 32-38 小時，適應(yīng)無血清化學(xué)限定培養(yǎng)基（如 CD CHO Medium），高密度培養(yǎng)時細胞密度可達 8×10?個 /mL，傳代 70 次以上仍保持穩(wěn)定生長速率，融合蛋白表達量無明顯衰減，凍存復(fù)蘇后存活率超 85%。

表達特征：該細胞系分泌的 TIM-4-Fc 融合蛋白兼具 TIM-4 的生物學(xué)活性與 Fc 段的純化優(yōu)勢：分子量約 60kDa（SDS-PAGE 檢測），TIM-4 部分可特異性識別凋亡細胞表面的磷脂酰絲an酸（PS），結(jié)合常數(shù)（KD）達 8.5×10?? M（流式細胞術(shù)檢測），與天然 TIM-4 受體活性相當(dāng)；同時對 EB 病毒、巨細胞病毒等包膜病毒具有親和力（KD≈2.3×10?? M）。Fc 段可通過 Protein A 親和層析高效純化（純度超 97%），4℃保存 30 天活性保留率超 88%。

優(yōu)勢：TIM-4-Fc 融合蛋白表達穩(wěn)定，長期傳代后活性波動＜10%，實驗重復(fù)性強；兼具對凋亡細胞與病毒的結(jié)合活性，可同時服務(wù)于免疫與病毒研究，應(yīng)用范圍廣泛；懸浮高密度培養(yǎng)時蛋白產(chǎn)量達 2.5-3.5g/L（流加培養(yǎng)），純化便捷，降低原料生產(chǎn)成本；對凋亡細胞的識別特異性高（與正常細胞結(jié)合率＜5%），實驗干擾小。

局限性：融合蛋白的 TIM-4 部分為倉鼠源，與人源 TIM-4 存在少量序列差異，部分人類細胞實驗需結(jié)合人源化改造株驗證；對不依賴 PS 暴露的病毒無明顯結(jié)合活性，應(yīng)用范圍存在局限；懸浮培養(yǎng)時聚集體過大（＞50μm）會降低蛋白分泌效率，需控制攪拌速率（90-110 rpm）。

培養(yǎng)條件：懸浮培養(yǎng)推薦使用無血清化學(xué)限定培養(yǎng)基，添加 200μg/mL 潮霉素維持抗性篩選，37℃、5% CO?環(huán)境中攪拌培養(yǎng)。傳代時維持細胞密度在 1.5×10?-6×10?個 /mL，避免營養(yǎng)匱乏影響蛋白表達。流加培養(yǎng)階段，補加葡萄糖（維持濃度 3-5g/L）與氨基酸混合液，可延長蛋白分泌期至 12 天以上。

質(zhì)控與安全：定期通過 Western blot 檢測融合蛋白表達，流式細胞術(shù)驗證對凋亡細胞的結(jié)合活性；STR 鑒定排除交叉污染，支原體檢測需為陰性。凍存使用含 10% DMSO 的無血清凍存液，液氮保存可維持活性 5 年以上，復(fù)蘇后傳代 2 次待狀態(tài)穩(wěn)定后用于實驗，涉及病毒操作需符合生物安全二級標準。