來源與馴化：該細胞系源自 CHO-K1 細胞，通過多輪克隆篩選與培養基適應性馴化獲得：初期以高表達重組人gan擾素 -γ 為指標，篩選高分泌單克隆；后續經無血清培養基逐步適應，增強懸浮生長能力與蛋白表達穩定性，最終獲得 CHO-D3a 株系。其名稱中的 “D3a" 源自馴化過程中第 3 代篩選的優勢克隆亞系，標識其經過系統優化的特性。

形態與增殖：體外培養呈典型上皮樣形態，可靈活適應貼壁與懸浮兩種生長模式，懸浮培養時形成直徑 20-60μm 的松散聚集體，細胞圓潤飽滿，邊緣清晰，活力長期維持在 93% 以上。在 37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 26-32 小時，適應多種無血清化學限定培養基（如 CHO-S-SFM II、CD FortiCHO），高密度流加培養時細胞密度可達 1.0×10?個 /mL，傳代 120 次以上仍保持穩定生長速率，蛋白表達量衰減＜8%，凍存復蘇后存活率超 90%。

表達特征：該細胞系的核心優勢在于重組蛋白高表達與質量均一性：轉染外源基因后，抗體類蛋白表達量可達 5-7g/L（流加培養條件下），較普通 CHO-K1 提升 35%-50%；分泌的重組蛋白糖基化修飾穩定，巖藻糖含量、半乳糖基化比例等關鍵質量屬性批間差異＜6%（UPLC 檢測），且蛋白聚合體含量＜1%（SEC-HPLC 檢測），遠超生物藥質量標準要求。

優勢：遺傳穩定性優異，長期傳代后生物學特性無明顯變化，實驗重復性強；蛋白表達量高且質量均一，降低生物藥生產的質量控制難度；兼容多種培養模式與培養基，從實驗室小規模培養到工業級生物反應器生產均可無縫銜接；對基因編輯工具（如 CRISPR/Cas9）的耐受性好，便于進行細胞系改造與功能優化。

局限性：部分含復雜糖基化修飾的蛋白（如某些凝xue因子）表達時，唾液酸含量略低于人源細胞，需通過糖基轉移酶工程改造優化；懸浮培養時聚集體大小易受攪拌速率影響，需精準控制工藝參數；初始克隆篩選周期較長（約 2-3 個月），不適合快速臨時表達需求。

培養條件：貼壁培養可使用含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養基，懸浮培養推薦無血清化學限定培養基，添加必要的微量元素與抗氧化劑。37℃、5% CO?環境中，攪拌速率控制在 100-140 rpm（懸浮培養），傳代時維持細胞密度在 3×10?-8×10?個 /mL，避免密度過高導致代謝物積累。流加培養階段，補加葡萄糖（維持濃度 3-5g/L）與氨基酸混合液，可延長蛋白分泌期至 14 天以上。

質控與安全：定期通過 STR 鑒定確認細胞身份，排除交叉污染；采用 ELISA 或 HPLC 檢測重組蛋白表達量與純度，確保穩定性；支原體檢測需為陰性，內毒素水平控制在 0.1EU/mL 以下。凍存使用含 10% DMSO 的無血清凍存液，梯度降溫后保存于液氮，復蘇后傳代 2-3 次待狀態穩定后用于生產，保證產品質量一致性。