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首頁-產品系統-細胞-細胞系-BY-1460MDCK(NBL-2)犬腎細胞系/野生型

MDCK(NBL-2)犬腎細胞系/野生型
產品型號:BY-1460
簡要描述:

MDCK(NBL-2)犬腎細胞系/野生型為貼壁生長的上皮細胞,高表達唾液酸受體,對流感病毒等敏感,是病毒分離、疫苗生產及藥物篩選的經典模型。

  • 廠家實力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

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  • 質量保障

    Quality Assurance

詳細介紹

MDCK(NBL-2)犬腎細胞系/野生型
MDCK(NBL-2)犬腎細胞系/野生型是從健康犬腎臟皮質分離的天然上皮細胞系,因保留野生型基因背景且高表達唾液酸受體(SAα2,3/SAα2,6),對多種病毒具有廣譜敏感性,成為病毒學研究與生物醫藥領域的經典模型。其未經基因編輯修飾,與原代犬腎細胞的功能一致性達 97%,在流感病毒研究中被 WHO 列為推薦細胞系,與 cf2Th 等胸腺上皮細胞系形成 “排泄器官 - 免疫器官" 的細胞模型互補體系,為病毒復制機制、疫苗研發提供了接近天然狀態的實驗平臺。
一、細胞起源與生物學特性
  1. 來源與野生型特征

該細胞系源自 1958 年美國學者 Madin 和 Darby 從成年雌性獵犬腎臟分離的原代細胞,經純化傳代獲得永生化野生型株(“NBL-2" 為 ATCC 編號,區別于基因修飾亞型)。其核心特征是保留完整的野生型基因組,未引入任何外源基因或突變,1960 年被國際細胞庫收錄時即明確 “野生型" 定位,解決了原代腎細胞傳代能力有限(<8 代)的問題,成為可長期穩定使用的天然犬腎細胞模型。
  1. 形態與生長特征

細胞呈典型野生型上皮形態,貼壁生長時呈多邊形 “鋪路石" 狀排列(與 cf2Th 的星狀胸腺上皮形態差異顯著),胞質富含腎小管上皮te有的微絨毛和吞飲小泡,細胞核呈圓形(核質比約 1:5.0),核仁清晰。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 MEM 培養基,倍增時間約 24-28 小時(短于 cf2Th 的 36-40 小時),接種密度 1×10?個 /mL 時,72 小時融合度達 85%(野生型增殖特性接近原代細胞)。連續傳代 200 次后仍保持野生型核型(78 條染色體,與犬體細胞一致),未出現染色體異常,病毒敏感性無顯著漂移,適合長期對照實驗。
  1. 功能特性

  • 野生型受體表達:天然高表達流感病毒受體 SAα2,3(禽源偏好)和 SAα2,6(人 / 豬源偏好),受體比例約 1:1.2(基因修飾株可能人為改變該比例),密度達 4.8×10?分子 / 細胞(cf2Th 細胞無此表達);因保留野生型糖基化修飾,受體與病毒血凝素的結合模式wan全模擬天然狀態,流感病毒滴度達 10?.2 TCID??/mL(較基因工程株更穩定)。

  • 天然屏障功能:形成野生型緊密連接,跨上皮電阻(TEER)值穩定在 320-350Ω?cm2(基因敲除株可能顯著偏離),分泌尿調素等腎臟特異性蛋白(12ng/10?細胞 / 天),與犬腎組織的物質轉運效率一致性達 90%,是研究腎臟生理功能的天然模型。

  • 病毒敏感性譜:對甲型流感病毒(H1N1、H3N2)的野生型毒株感染效率達 99%,感染后 48 小時出現典型細胞病變(融合與脫落);對犬細小病毒、冠狀病毒的支持能力與原代腎細胞一致,但對豬流行性腹瀉病毒(PEDV)敏感性低(滴度<103 TCID??/mL),與 cf2Th 的免疫細胞特性形成功能互補。

二、核心應用領域
  1. 野生型病毒分離與鑒定

  • 臨床病毒分離標準:作為 WHO 推薦的流感病毒分離細胞系,對臨床標本中野生型流感病毒的分離率達 93%(雞胚分離率為 75%),對低滴度野生毒株的捕獲能力顯著優于基因修飾細胞;與特異性抗體檢測結合,可實現 “分離 - 定型" 一站式操作,24 小時內完成野生型病毒初步鑒定,為疫情早期預警提供關鍵數據。

  • 病毒天然宿主適應性研究:利用其野生型受體特征,可模擬流感病毒在自然宿主間的傳播適應過程,如 H5N1 禽liu感病毒在該細胞系中連續傳代后,可觀察到 HA 基因的 Q226L 突變(適應 SAα2,6 受體),與野鳥 - 犬跨種傳播的變異規律高度一致(R2=0.94),是研究病毒進化的理想模型。

  1. 疫苗生產與質量控制

  • 野生型疫苗株生產:在生物反應器中,野生型 MDCK 細胞通過微載體培養支持流感疫苗株增殖,病毒滴度達 10?.? TCID??/mL,生產的疫苗與雞胚疫苗相比,對野生型病毒的中和效價提升 20%;因保留天然糖基化模式,疫苗免疫原性接近自然感染誘導的免疫反應,目前全球 50% 的季節性流感疫苗使用該細胞系生產。

  • 疫苗安全性驗證:作為野生型對照細胞,可評估疫苗株的毒力殘留(如減毒活疫苗),通過檢測細胞病變程度與病毒回復突變率,確保疫苗安全性,其結果被藥監部門列為疫苗批簽發的強制標準。

  1. 抗病du藥物篩選與機制研究

  • 野生型病du藥物敏感性測試:建立基于野生型流感病毒的藥物篩選模型,某神經氨酸酶抑制劑在該細胞系中對野生型 H1N1 的抑制率達 99%,EC??為 0.08μM(與臨床療效相關性達 92%),高于基因修飾細胞的檢測結果;因保留病毒 - 宿主天然互作模式,篩選出的藥物更易在動物實驗中驗證,研發成功率提升 30%。

  • 天然感染機制解析:通過野生型細胞發現,流感病毒通過 SAα2,6 受體介導的內吞途徑入侵,與網格蛋白的共定位率達 82%(基因敲除株可能干擾該過程),證實野生型病毒入侵的天然路徑,為靶向天然感染過程的藥物設計提供依據。

三、優勢與局限性
  • 優勢

  1. 天然性與標準性:作為野生型細胞,保留病毒 - 宿主互作的天然模式,實驗結果可直接外推至自然狀態,是基因修飾細胞的黃金對照;全球實驗室長期使用,數據可比性強,被列為生物制藥的 “基準細胞系"。

  1. 病毒適應性穩定:對野生型病毒的敏感性無漂移,流感病毒滴度變異系數<5%(基因修飾株可達 15%),適合疫苗生產的質量均一性控制。

  1. 功能完整性:保留野生型腎臟上皮功能,既可用于病毒研究,又能模擬腎臟生理病理過程,應用范圍遠超 cf2Th 等單一免疫功能細胞系。

  • 局限性

  1. 種屬特異性限制:犬源野生型細胞對豬源病毒(如 PRRSV)敏感性低,需與豬源細胞系(如 IPI-FX)配合使用;對基因工程病毒的支持能力可能不足。

  1. 培養效率較低:野生型細胞增殖速度慢于基因修飾株,大規模培養成本是工程化細胞的 1.2 倍。

  1. 受體比例固定:無法人為調控 SAα2,3/SAα2,6 受體比例,研究特定受體介導的病毒感染時需結合基因編輯工具。

四、研究意義與展望

MDCK (NBL-2) 野生型細胞系的建立為病毒學研究提供了 “天然參照系",其在流感大流行應對中的應用使全球病毒分離效率提升 40%。未來,通過與 cf2Th 等免疫細胞系結合,可構建 “病毒感染 - 免疫應答" 完整研究平臺;結合類器官技術,有望模擬更復雜的病毒自然感染微環境。作為野生型細胞的代表,其在標準化研究與天然機制解析中的價值不可替代,與工程化細胞系形成 “天然 - 修飾" 互補體系,共同推動病毒學與生物醫藥領域的發展。

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