B95-8絨猴EBV轉化的白細胞系

B95-8絨猴EBV轉化的白細胞系，B95-8 細胞系是從絨猴外周血白細胞經 EB 病毒（EBV）轉化建立的淋巴母細胞系，因穩定攜帶 EBV 基因組且能持續分泌傳染性病毒顆粒，成為 EBV 研究、疫苗研發及 B 淋巴細胞功能探索的核心模型。其保留了靈長類 B 淋巴細胞的表型特征，同時因病毒轉化獲得永生化特性，為解析 EBV 致癌機制、開發抗病du藥物提供了兼具生理相關性與實驗穩定性的工具，尤其在傳染性單核細胞增多癥、Burkitt 淋巴瘤等疾病研究中具有不可替代的價值。

一、細胞起源與生物學特性

來源與建立背景

B95-8 細胞系源自 1973 年美國華盛頓大學從棉頂絨猴外周血分離的 B 淋巴細胞，經 EBV 體外感染后獲得永生化表型（“B95" 代表絨猴物種代號，“8" 為第 8 株克隆株）。該細胞系因能高效分泌傳染性 EBV 顆粒（滴度居同類細胞系shou位），1980 年被確立為 EBV 研究的標準細胞系，解決了原代 B 淋巴細胞體外存活時間短、EBV 復制效率低的問題，成為首ge能穩定生產傳染性 EBV 的靈長類細胞系。

形態與生長特征

細胞呈典型淋巴母細胞樣形態，懸浮生長時呈圓形或橢圓形，胞體直徑約 12-15μm，胞質少而透亮，細胞核大且呈不規則形（核質比約 1:1.5），可見 1-2 個明顯核仁。在 37℃、5% CO?條件下，使用含 15% 胎牛血清的 RPMI 1640 培養基，倍增時間約 36-40 小時，傳代比例 1:3 至 1:5，每周換液 2 次以維持細胞密度在 5×10?-1×10?個 /mL。細胞凍存復蘇存活率超 85%，連續傳代 150 次后仍保持穩定核型（46 條染色體），EBV 基因組整合狀態無顯著變化，符合長期實驗要求。

功能特性

EBV 攜帶與分泌：細胞基因組中整合有 EBV 完整基因組（約 10-15 拷貝 / 細胞），同時約 5% 的細胞處于裂解期，可分泌傳染性病毒顆粒，上清中病毒滴度達 10?-10? PFU/mL（顯著高于其他轉化細胞系）；表達 EBV 標志性抗原，如核抗原 1（EBNA1）、潛伏膜蛋白 1（LMP1），免疫熒光陽性率均超 95%。

B 淋巴細胞表型：保留 B 細胞表面標志物，如 CD19（陽性率 98%）、CD20（陽性率 96%），同時表達 EBV 誘導的活化標志物 CD23（陽性率 80%），模擬 EBV 感染后的 B 細胞活化狀態；可在體外經細胞因子誘導分化為漿細胞，分泌免疫球蛋白 M（IgM），體現 B 細胞功能特征。

病毒敏感性：除 EBV 外，對其他皰疹病毒（如巨細胞病毒）也具有一定敏感性，感染后可觀察到典型的皰疹病毒復制周期，但復制效率低于 EBV，提示其對 EBV 存在特異性依賴。

二、核心應用領域

EBV 生物學與致病機制研究

病毒復制周期解析：利用其分泌傳染性病毒的特性，解析 EBV 潛伏態與裂解態轉換機制，發現丁酸鈉可誘導 90% 的細胞進入裂解期，病毒 DNA 復制相關基因（如 BALF5）表達量提升 50 倍，為理解 EBV 潛伏感染機制提供關鍵證據。

致癌機制探索：通過基因編輯技術敲除 LMP1 基因后，細胞增殖速率下降 40%，凋亡率提升 3 倍，證實 LMP1 在 EBV 誘導細胞永生化中的核心作用；同時發現該細胞系可自發形成裸鼠移植瘤，腫瘤組織中存在 EBV 基因組，模擬 Burkitt 淋巴瘤的發病過程。

疫苗研發與抗病du藥物篩選

EBV 疫苗生產：作為 EBV 疫苗候選抗原的主要表達系統，B95-8 細胞分泌的病毒包膜糖蛋白 gp350 產量達 2μg/10?細胞 / 天，該蛋白免疫動物后可誘導高滴度中和抗體（效價達 1:10000），能有效阻斷 EBV 對 B 細胞的感染，為疫苗研發提供關鍵抗原。

藥物篩選模型：基于其病毒分泌特性建立高通量抗病du藥物篩選體系，日均可檢測 200 種化合物。篩選出的核苷類似物可使病毒滴度下降 1000 倍，且對細胞毒性低（CC??/EC??＞50），為臨床用藥提供候選分子。

免疫學與診斷試劑開發

B 細胞功能研究：用于探索 EBV 對 B 細胞活化與分化的調控，發現 EBV 感染可使 B 細胞表面 CD40 表達量提升 3 倍，IL-6 分泌增加 5 倍，揭示病毒通過共刺激分子調控 B 細胞增殖的機制。

診斷試劑生產：利用其高表達 EBV 抗原的特性，制備 EBV 抗體檢測試劑盒，如 EBNA1 IgG 檢測試劑靈敏度達 92%，特異性 95%，較傳統 ELISA 試劑準確率提升 15%，被廣泛用于傳染性單核細胞增多癥的臨床診斷。

三、培養與實驗操作要點

基礎培養方案

培養基：RPMI 1640 培養基添加 15% 胎牛血清、10mM HEPES、1% 青mei素 - 鏈mei素，pH 維持在 7.2-7.4；為促進病毒分泌，可添加 3mM 丁酸鈉（處理 48 小時），使病毒滴度提升 5-10 倍。

傳代流程：當細胞密度達 1×10?個 /mL 時，按 1:4 比例稀釋傳代，無需消化處理，直接將細胞懸液轉移至新培養瓶并補充新鮮培養基，離心速度 800rpm（避免細胞損傷），24 小時存活率超 90%。

凍存保護：采用含 10% DMSO 的wan全培養基，細胞密度 2×10?個 /mL，程序降溫至 - 80℃過夜后轉入液氮，復蘇時 37℃水浴 1 分鐘，直接接種至預熱培養基，48 小時后換液，存活率可達 85%。

病毒培養與功能實驗

EBV 收集與滴定：細胞培養 72 小時后收集上清，3000rpm 離心 10 分鐘去除細胞碎片，通過感染 Raji 細胞測定病毒滴度，以出現 EBNA1 陽性細胞的最高稀釋度為終點，結果變異系數＜8%。

潛伏 - 裂解轉換實驗：細胞接種后加入 3mM 丁酸鈉，分別在 0、24、48 小時收集樣本，通過 Western blot 檢測裂解期蛋白 BZLF1（48 小時達表達峰值），或通過 qPCR 測定病毒 DNA 拷貝數（48 小時提升 100 倍）。

四、優勢與局限性

優勢：

EBV 分泌能力：是目前唯yi能穩定分泌高滴度傳染性 EBV 的細胞系，為病毒分離、純化及功能研究提供不可替代的材料，被全球實驗室列為 EBV 研究的 “標準品"。

B 細胞表型保留：保留 B 淋巴細胞的功能特征，可模擬體內 EBV 感染后的 B 細胞狀態，研究結果的生理相關性顯著高于非淋巴細胞系。

實驗穩定性：連續傳代后 EBV 攜帶狀態與分泌能力保持穩定，實驗數據重復性達 90%，適合長期機制研究與藥物篩選。

局限性：

物種差異：源自絨猴而非人類，EBV 感染后的細胞反應與人類 B 細胞存在一定差異，研究結果需在人源細胞系中驗證。

病毒依賴特性：細胞存活依賴 EBV 潛伏感染，無法建立 EBV 陰性對照細胞系，限制了部分對照實驗的開展。

培養條件苛刻：對血清質量與培養環境敏感，更換血清批次需進行預實驗，否則易導致病毒分泌量下降。

五、研究意義與展望

B95-8 細胞系的建立為 EBV 研究領域奠定了重要基礎，其在病毒復制機制、致癌蛋白功能等方面的應用，推動了人類對 EBV 相關疾病的認知。未來，通過基因編輯技術人源化其 B 細胞受體，可提升模型的臨床相關性；結合類器官技術構建 “淋巴組織 - 腫瘤" 模型，有望模擬 EBV 從感染到致癌的完整過程，為 EBV 相關腫瘤的精準治療提供新平臺。作為 EBV 研究的 “基石"，該細胞系仍將在病毒學與腫瘤學領域長期發揮核心作用。

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