WEHI-13VAR小鼠纖維肉瘤細胞系
WEHI-13VAR小鼠纖維肉瘤細胞系源自 BALB/c 小鼠誘發性纖維肉瘤，是保留間葉組織惡性增殖特性和高轉移潛能的經典肉瘤模型，在纖維肉瘤的侵襲轉移機制、間質重塑及抗肉瘤藥物篩選研究中具有重要價值，為解析這種間葉源性惡性腫瘤的生物學行為提供了理想工具。
該細胞系呈現典型的纖維肉瘤細胞形態與表型特征。顯微鏡下，細胞呈長梭形或紡錘形，以貼壁生長為主，排列成束狀或漩渦狀，模擬成纖維細胞的排列方式。細胞核呈橢圓形或桿狀，核質比高，染色質呈粗顆粒狀，可見 1-2 個明顯核仁，核分裂象活躍（每 10 個高倍視野 8-10 個），胞質豐富，呈嗜酸性，可見細長胞質突起，電鏡下可見胞質內富含肌動蛋白微絲和粗面內質網，符合纖維肉瘤的超微結構特點。免疫表型分析顯示，細胞高表達間葉組織標志物 vimentin（陽性率 95%）和 α- 平滑肌肌動蛋白（α-SMA，陽性率 60%），流式細胞術檢測顯示 vimentin 陽性細胞比例顯著高于其他肉瘤細胞系，而上皮標志物 CK 陰性，證實其純間葉源性特征。
體外培養體系中，WEHI-13VAR 細胞展現出旺盛的增殖能力與強侵襲特性。最適培養條件為含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培養基，添加 1% 谷an酰胺，在 37℃、5% CO?環境下，傳代周期約 60 小時，倍增時間約 45 小時，顯著快于正常成纖維細胞。其顯著特點是體外可分泌大量膠原蛋白（Ⅰ 型和 Ⅲ 型），形成富含基質的生長環境，這種特性與其高表達轉化生長因子 -β1（TGF-β1）相關（分泌量是正常成纖維細胞的 3 倍）。Transwell 侵襲實驗顯示，其穿透人工基底膜的能力是其他纖維肉瘤細胞系的 2.5 倍，這種高侵襲性依賴于高表達的基質金屬蛋白酶 - 1（MMP-1）和 MMP-3，酶活性分別較其他肉瘤細胞高 4 倍和 5 倍，可高效降解結締組織基質。軟瓊脂克隆形成率達 45%，克隆形態呈不規則放射狀，邊緣有細長突起，連續傳代 50 次后，vimentin 表達及侵襲能力無明顯衰減，凍存復蘇存活率超 90%。
在動物模型中，WEHI-13VAR 細胞的成瘤與轉移模式ji具特點。將 1×10?個細胞皮下接種 BALB/c 小鼠，7 天形成實體瘤，14 天腫瘤突破包膜侵襲周圍肌肉組織，21 天肺轉移率達 75%（肝轉移率 40%），模擬人類纖維肉瘤的血行轉移偏好。病理切片顯示腫瘤組織由密集的梭形細胞構成，呈編織狀排列，可見病理性核分裂象，免疫組化可見 vimentin 陽性細胞彌漫分布，肺轉移灶保留原發灶的梭形細胞形態。熒光標記追蹤證實，腫瘤細胞通過血液循環定植于肺臟，高表達血管內皮細胞黏附分子 CD44，黏附率達 60%，CD44 抗體處理可使肺轉移率下降 65%。
發病機制研究揭示其te有的分子異常。基因測序顯示，細胞存在 N-ras 基因第 61 密碼子突變（Q61K）和 p53 基因缺失，導致 RAS/RAF/MEK 通路持續激活，Western blot 檢測顯示磷酸化 ERK（p-ERK）表達量較正常成纖維細胞高 8 倍，使用 MEK 抑制劑處理后，細胞增殖率下降 70%，凋亡率上升 50%，證實該通路在其惡性增殖中的核心作用。此外，細胞中 Hedgehog 信號通路異常激活，Gli1 轉錄因子表達量較正常細胞高 6 倍，可促進間質細胞增殖和腫瘤侵襲，Hedgehog 通路抑制劑處理可使腫瘤體積縮小 55%。
轉移機制方面，WEHI-13VAR 細胞的肺轉移涉及多重調控。除 CD44 介導的血管黏附外，細胞高表達趨化因子受體 CXCR4，可響應肺組織高濃度的 CXCL12，遷移能力是 CXCR4 陰性細胞的 2.3 倍，CXCR4 拮抗劑處理可使肺轉移灶數量減少 55%。基因芯片分析顯示，轉移灶細胞中與間質重塑相關的基因 Snail 和 Twist 表達上調，E - 鈣粘蛋白表達下降 60%，使細胞更易脫離原發灶進入血液循環，Snail 沉默后轉移率下降 50%。
在藥物篩選應用中，該細胞系是評估纖維肉瘤藥物的有效模型。基于其 N-ras 突變特性，對 MEK 抑制劑敏感，半數抑制濃度（IC50）約 0.5μM，藥物處理后細胞 G1 期比例增加 45%，凋亡率上升 40%。體內實驗顯示，MEK 抑制劑口服可使 BALB/c 小鼠皮下腫瘤體積縮小 70%，肺轉移率從 75% 降至 25%，療效顯著。其高間質特性使其成為抗纖維化藥物的理想模型，某新型 TGF-β1 抑制劑可減少膠原蛋白分泌，使腫瘤間質減少 50%，同時抑制細胞侵襲（能力下降 60%）。
在腫瘤微環境研究中，WEHI-13VAR 細胞與腫瘤相關成纖維細胞（CAF）的相互作用為解析轉移機制提供了線索。共培養實驗顯示，CAF 分泌的血小板衍生生長因子（PDGF）可激活腫瘤細胞的 PDGFRβ 通路，使 MMP-2 表達上調 3 倍，侵襲能力增強 60%，PDGF 中和抗體可阻斷這種促進作用。在缺氧微環境（1% O?）中，細胞 HIF-1α 表達上調，誘導血管內皮生長因子（VEGF）分泌增加，使腫瘤內微血管密度增加 2 倍，VEGF 抗體處理可抑制腫瘤生長及轉移。
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