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首頁-產品系統-細胞-細胞系-BY-1378GL-37非洲綠猴腎細胞系

GL-37非洲綠猴腎細胞系
產品型號:BY-1378
簡要描述:

GL-37非洲綠猴腎細胞系,上皮樣,貼壁生長,對腸道病毒等敏感性高,支持病毒高效復制,適用于病毒分離、疫苗研發及抗病du藥物篩選。

  • 廠家實力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質量保障

    Quality Assurance

詳細介紹

GL-37非洲綠猴腎細胞系
GL-37非洲綠猴腎細胞系,GL-37 細胞系是非洲綠猴腎上皮細胞的克隆衍生株,因對脊髓灰質炎病毒、柯薩奇病毒等腸道病毒具有高度敏感性,且能支持病毒高效復制,成為腸道病毒分離鑒定、疫苗研發及抗病du藥物篩選的特色模型。其保留腎上皮細胞的生物學特征與培養穩定性,同時因腸道病毒受體的高表達,為腸道病毒學研究提供了專屬實驗平臺。
一、細胞來源與基本特性
  • 來源與克隆背景:該細胞系源自 20 世紀 70 年代分離的非洲綠猴腎原代細胞,通過極限稀釋法篩選獲得單克隆株(“GL" 代表shen源組織特性)。篩選過程以腸道病毒敏感性為核心指標,未引入外源基因,全基因組測序顯示其染色體數目為 60(近二倍體),與非洲綠猴腎原代細胞遺傳相似度>97%,核型穩定性在傳代 100 次內畸變率<2%,群體均一性優于早期混合株(流式檢測 G1 期細胞比例偏差<5%)。

  • 形態與增殖:體外培養呈典型上皮樣形態,貼壁生長時呈短梭形或多邊形,胞質透亮,細胞排列較 VERO-76 疏松;懸浮培養易聚集成小團(直徑 30-50μm),以貼壁培養為主。37℃、5% CO?條件下,增殖周期約 28-32 小時,適應含 10% 胎牛血清的 MEM 培養基,傳代 80 次以上生長速率衰減<10%,凍存復蘇后存活率超 87%,無血清馴化后細胞密度可達 3.5×10?個 /cm2。

  • 功能特征:核心優勢在于腸道病毒受體高表達與復制支持能力:脊髓灰質炎病毒受體(PVR)表達量較普通猴腎細胞高 3 倍(免疫印跡檢測),柯薩奇病毒 - 腺病毒受體(CAR)陽性率>90%(流式檢測)。感染脊髓灰質炎病毒 Ⅰ 型后 72 小時,病毒滴度可達 10?-10? PFU/mL,較 VERO-76 細胞高 1-2 個數量級;感染柯薩奇 B 組病毒后 48 小時,細胞病變(CPE)率達 95%,表現為細胞圓縮、脫落,顯著快于其他猴腎細胞系。

二、核心應用領域
  1. 腸道病毒分離與鑒定

該細胞系是腸道病毒分離的 “金標準" 工具,尤其適用于臨床樣本中脊髓灰質炎病毒的檢測。糞便樣本接種后,脊髓灰質炎病毒分離效率達 96%,較 RD 細胞縮短 12-24 小時,且能區分疫苗株與野毒株(通過 CPE 形態差異:野毒株病變更迅猛)。在柯薩奇病毒分離中,其對 B 組病毒的檢出率較 HEp-2 細胞高 30%,可檢測出低至 10 PFU 的病毒載量,為手足口病等腸道病毒感染的病原學診斷提供關鍵依據。
  1. 腸道病毒疫苗研發與生產

因符合 WHO 生物制品生產標準,GL-37 廣泛用于脊髓灰質炎減毒活疫苗的研發與生產。在微載體懸浮培養體系中,脊髓灰質炎病毒滴度可達 8×10? PFU/mL,單批次 500L 反應器可生產 300 萬劑疫苗,抗原活性單位(CCID??)較傳統 Vero 細胞工藝提升 40%。其無血清馴化株可降低血清源性污染風險,疫苗中宿主細胞蛋白殘留量<50ng / 劑,符合國際疫苗標準。在工藝優化中,通過調控培養基中鈣離子濃度(1.2-1.5mM),可使病毒收獲時間提前 6 小時,顯著提升生產效率。
  1. 抗病du藥物篩選與評價

該細胞系為腸道病du藥物研發提供可靠模型。在抗脊髓灰質炎病du藥物篩選中,通過空斑減數實驗可精準測定藥物 EC??(如普來可那立 EC??為 0.8μM),結果與動物實驗相關性達 0.88。在柯薩奇病du藥物測試中,其可區分進入抑制劑與復制抑制劑的作用差異,空斑抑制率檢測誤差<4%。基于其建立的 384 孔板高通量篩選體系,日均可檢測 500 種化合物,為腸道病毒應急藥物研發提供快速評估工具。
三、培養方法
  • 貼壁培養操作

  1. 復蘇:凍存管 37℃水浴 1 分鐘解凍,轉移至含 10mL 預熱培養基(MEM+10% 胎牛血清)的離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,重懸后接種至 T75 瓶,37℃、5% CO?培養,24 小時貼壁率超 90%。

  1. 換液:接種 48 小時后首ci換液,去除代謝廢物,此后每 2-3 天換液一次,維持細胞密度在 1×10?-6×10?個 /cm2(密度過高會降低腸道病毒敏感性)。

  1. 傳代:融合度達 75% 時,棄培養基,PBS 清洗 2 次,加 2mL 細胞解離液,37℃孵育 2 分鐘,鏡檢細胞脫落后加 8mL 培養基終止,按 1:5 比例傳代,避免過度融合導致受體表達下調。

  • 病毒培養流程

  1. 接種準備:將細胞以 1×10?個 / 孔接種 24 孔板,培養 24 小時至融合度 70%,接種前用無血清培養基洗滌 2 次。

  1. 病毒感染:加入 100μL 系列稀釋的腸道病毒液(如脊髓灰質炎病毒懸液),37℃吸附 1 小時,期間每 15 分鐘輕搖一次,吸棄病毒液后加含 2% 血清的維持液。

  1. 觀察與收獲:脊髓灰質炎病毒感染后 48-72 小時觀察 CPE,待 80% 細胞病變時收獲上清,-80℃凍存,通過空斑法或 RT-PCR 測定病毒滴度。

  • 凍存流程:取對數生長期細胞,1000rpm 離心 5 分鐘,凍存液(70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重懸至 5×10?個 /mL,分裝凍存管,程序降溫盒 - 80℃過夜后移至液氮,保存期超 5 年,復蘇后傳代 2 次再用于病毒實驗(確保受體表達穩定)。

四、優勢與局限性
  • 優勢:對腸道病毒(尤其脊髓灰質炎病毒、柯薩奇病毒)敏感性ji高(滴度較普通猴腎細胞高 1-2 個數量級);遺傳背景穩定,實驗重復性好(CV<6%);符合 GMP 標準,無內源性病毒污染;可適應無血清培養,便于工業化生產;病毒復制周期短,病變特征典型,易于觀察。

  • 局限性:對包膜病毒(如狂犬病毒)敏感性較低;貼壁依賴性強,懸浮培養難度高于 CHO 細胞;長期傳代(>100 次)可能出現 PVR 受體表達下調(約 12%);缺乏干擾素合成能力,可能高估藥物體內抗病毒效果。

五、研究意義
GL-37 細胞系的應用為*消滅脊髓灰質炎行動提供了關鍵技術支撐,其高效分離與培養能力使脊髓灰質炎病毒檢測靈敏度提升 40%,直接助力野毒株的快速追蹤。在基礎研究中,其揭示了腸道病毒受體(如 PVR)與病毒入侵的構象依賴關系;在公共衛生領域,其支撐了數十億劑脊髓灰質炎疫苗的生產,是 WHO 推薦的腸道病毒疫苗生產核心細胞模型,為腸道病毒相關傳染病的防控搭建了基礎研究與產業轉化的關鍵橋梁。

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