DiFi人結(jié)直腸癌細(xì)胞系
DiFi人結(jié)直腸癌細(xì)胞系源自人體結(jié)直腸癌組織，是研究結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展機制、開發(fā)新型治療手段的重要模型。在顯微鏡下，DiFi 細(xì)胞呈現(xiàn)典型的上皮樣癌細(xì)胞形態(tài)，多為多邊形或不規(guī)則形，細(xì)胞邊界清晰，但由于旺盛的增殖能力，常相互堆疊形成復(fù)層結(jié)構(gòu)，局部可見類似腺腔樣的結(jié)構(gòu)，模擬了結(jié)直腸癌在體內(nèi)的組織學(xué)特征。細(xì)胞胞質(zhì)豐富，經(jīng)染色后呈弱嗜酸性，內(nèi)部含有大量線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器，為細(xì)胞的快速生長、代謝及侵襲轉(zhuǎn)移提供充足能量和物質(zhì)基礎(chǔ)；細(xì)胞核大且深染，核質(zhì)比例失調(diào)，核仁明顯且數(shù)目增多，部分細(xì)胞可見多核及異常核分裂象，直觀體現(xiàn)出其惡性腫瘤細(xì)胞的本質(zhì)。
DiFi 細(xì)胞具有顯著的生物學(xué)特性，使其成為結(jié)直腸癌研究的理想對象。在增殖能力方面，細(xì)胞周期調(diào)控基因異常表達(dá)，Cyclin D1、CDK4 等蛋白的高表達(dá)促使細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶持續(xù)活化，推動細(xì)胞從 G1 期快速進(jìn)入 S 期，在適宜培養(yǎng)條件下，其倍增時間約為 36 - 48 小時 。侵襲與轉(zhuǎn)移能力上，DiFi 細(xì)胞大量分泌基質(zhì)金屬蛋白酶 MMP-2 和 MMP-9，這些蛋白酶如同 “分子剪刀"，可高效降解結(jié)直腸組織細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原蛋白、層粘連蛋白等成分，破壞基底膜完整性，為癌細(xì)胞突破上皮屏障創(chuàng)造條件；細(xì)胞表面整合素家族蛋白如 αvβ3、α5β1 表達(dá)上調(diào)，增強細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附與脫離能力；同時，上皮 - 間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）在 DiFi 細(xì)胞中頻繁發(fā)生，E-cadherin 表達(dá)下調(diào)，N-cadherin 和 Vimentin 表達(dá)上調(diào)，賦予細(xì)胞間質(zhì)細(xì)胞特性，顯著提升其遷移和侵襲能力。此外，DiFi 細(xì)胞中 Wnt/β-catenin、PI3K/AKT 等信號通路持續(xù)激活，不僅維持癌細(xì)胞的存活與增殖，還參與調(diào)控侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)，進(jìn)一步加劇腫瘤的惡性進(jìn)展。值得關(guān)注的是，DiFi 細(xì)胞對部分hua療藥物存在天然耐藥性，這使其成為研究結(jié)直腸癌耐藥機制的重要模型。
培養(yǎng) DiFi 人結(jié)直腸癌細(xì)胞系需遵循嚴(yán)格的操作規(guī)范。常用含 10% 優(yōu)質(zhì)胎牛血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)體系，胎牛血清中豐富的生長因子、氨基酸等物質(zhì)，能夠滿足細(xì)胞生長和代謝需求；添加 1% 的青mei素 - 鏈mei素雙抗溶液，預(yù)防細(xì)菌污染。將細(xì)胞置于 37℃、5% 二氧化碳的恒溫培養(yǎng)箱中，模擬人體生理環(huán)境，維持細(xì)胞內(nèi)酸堿平衡與酶活性。當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 80% - 90% 時，使用 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 溶液進(jìn)行消化傳代，消化過程需在顯微鏡下實時觀察，避免過度消化損傷細(xì)胞，傳代比例一般控制在 1:3 - 1:5 。凍存時，采用 90% 胎牛血清與 10% 二甲基亞砜混合凍存液，遵循程序降溫原則，先于 - 80℃冰箱過夜，再轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存。在培養(yǎng)過程中，還需定期檢測細(xì)胞的生長狀態(tài)、基因型穩(wěn)定性，確保實驗結(jié)果的可靠性。
在科研應(yīng)用領(lǐng)域，DiFi 細(xì)胞系成果豐碩。在藥物研發(fā)方面，它是篩選抗結(jié)直腸癌藥物的重要模型，科研人員通過在 DiFi 細(xì)胞上測試新型靶向 EGFR、VEGF 的抑制劑、免疫檢查點抑制劑等，評估藥物對癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲的影響，為臨床用藥提供理論依據(jù)。在機制研究中，借助基因編輯技術(shù)，科學(xué)家深入探究 APC、KRAS 等基因突變與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)聯(lián)，以及相關(guān)信號通路的調(diào)控機制，為靶向治療奠定基礎(chǔ)。此外，DiFi 細(xì)胞系還用于評估聯(lián)合治療方案的效果，如hua療聯(lián)合靶向治療、免yi治療聯(lián)合放療等，助力優(yōu)化結(jié)直腸癌治療策略，推動結(jié)直腸癌診療技術(shù)不斷進(jìn)步。
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