產(chǎn)品系統(tǒng)PRODUCT CENTER
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首頁(yè)-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-1447IBRS-2豬腎傳代細(xì)胞系


廠家實(shí)力
Manufacturer Strength
有效保修
Valid Warranty
質(zhì)量保障
Quality Assurance產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES
詳細(xì)介紹
來(lái)源與建立背景
形態(tài)與生長(zhǎng)特征
功能特性
病毒受體廣譜表達(dá):高表達(dá)多種豬源病毒受體,如口蹄疫病毒受體整合素 αvβ6(陽(yáng)性率 95%)、豬瘟病毒受體 CD46(陽(yáng)性率 93%),其受體表達(dá)譜覆蓋 80% 的常見(jiàn)豬源病毒;與 PK-15-KO-MAP3K8 相比,其天然受體表達(dá)未受基因編輯干擾,更接近在體腎臟細(xì)胞的病毒識(shí)別特性。
病毒復(fù)制支持能力:對(duì)豬瘟病毒的感染效率達(dá) 98%,病毒滴度可達(dá) 10? TCID??/mL(與 PK-15-KO-MAP3K8 相當(dāng));對(duì)口蹄疫病毒的復(fù)制效率顯著優(yōu)于其他細(xì)胞系,48 小時(shí)病毒滴度達(dá) 10?.? TCID??/mL,且能穩(wěn)定產(chǎn)生典型空斑,是該病毒空斑實(shí)驗(yàn)的金標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系。
代謝與培養(yǎng)適應(yīng)性:葡萄糖消耗速率達(dá) 45mg/L/h(高于 PK-15-KO-MAP3K8),可在低血清(2%)培養(yǎng)基中維持 80% 以上活性,對(duì)培養(yǎng)條件波動(dòng)的耐受性強(qiáng),適合資源有限的基層實(shí)驗(yàn)室使用。
豬源病毒分離與鑒定
臨床樣本檢測(cè):作為豬瘟病毒分離的shou選細(xì)胞系,IBRS-2 從臨床組織樣本中的病毒分離率達(dá) 90%(顯著高于原代細(xì)胞的 60%),且 3 天內(nèi)即可觀察到典型細(xì)胞病變(胞質(zhì)內(nèi)顆粒增多、細(xì)胞融合),我國(guó)基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室廣泛將其用于豬瘟疫情的快速確診。
病毒分型研究:利用其對(duì)口蹄疫病毒各血清型的廣譜敏感性,可通過(guò)空斑形態(tài)差異區(qū)分 O 型與 A 型病毒(O 型空斑直徑 2-3mm,A 型 1-2mm),為病毒分型提供直觀依據(jù),該方法被 OIE 納入標(biāo)準(zhǔn)操作程序。
疫苗生產(chǎn)與質(zhì)量控制
常規(guī)疫苗生產(chǎn):在豬瘟滅活疫苗生產(chǎn)中,IBRS-2 細(xì)胞的病毒產(chǎn)量達(dá) 10?.2 TCID??/mL,單位面積產(chǎn)量是 PK-15-KO-MAP3K8 的 1.2 倍,且生產(chǎn)成本降低 30%(無(wú)需基因編輯相關(guān)優(yōu)化);我國(guó)年產(chǎn) 80% 的豬瘟疫苗采用該細(xì)胞系生產(chǎn),累計(jì)應(yīng)用超 50 年。
疫苗效力檢測(cè):作為口蹄疫疫苗批簽發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系,其病毒中和試驗(yàn)結(jié)果與豚鼠攻毒保護(hù)率一致性達(dá) 90%,檢測(cè)成本僅為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的 1/5,且耗時(shí)從 21 天縮短至 72 小時(shí),大幅提升疫苗質(zhì)量控制效率。
基礎(chǔ)病毒學(xué)研究
病毒入侵機(jī)制解析:通過(guò)該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)口蹄疫病毒通過(guò)整合素 αvβ6 介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞,其入侵效率與受體表達(dá)量呈正相關(guān)(R2=0.91),該發(fā)現(xiàn)為靶向受體的抗病du藥物開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。
抗病du藥物初篩:建立基于 IBRS-2 的高通量篩選模型,日均可檢測(cè) 200 種化合物,某植物提取物在該模型中顯示對(duì)口蹄疫病毒的抑制率達(dá) 85%(EC??=12μg/mL),后續(xù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證有效,證實(shí)其篩選可靠性。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基:采用含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基,pH 維持在 7.2-7.4;低成本培養(yǎng)可使用 5% 新生牛血清替代,細(xì)胞活性保持 90% 以上,病毒產(chǎn)量下降不超過(guò) 10%。
傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 80% 時(shí),按 1:5-1:6 比例接種,0.25% yi酶消化 30 秒即可,離心速度 800rpm,24 小時(shí)貼壁率超 95%,操作簡(jiǎn)便性優(yōu)于 PK-15-KO-MAP3K8。
凍存保護(hù):采用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基,細(xì)胞密度 1.5×10?個(gè) /mL,-80℃凍存可保存 6 個(gè)月(存活率>85%),液氮保存可達(dá) 5 年以上,復(fù)蘇后 24 小時(shí)即可恢復(fù)正常增殖。
病毒培養(yǎng)與檢測(cè)操作
豬瘟病毒培養(yǎng):細(xì)胞以 2×10?個(gè) / 孔接種 24 孔板,培養(yǎng) 24 小時(shí)后接種病毒(MOI=0.01),37℃培養(yǎng) 72 小時(shí),通過(guò)間接免疫熒光檢測(cè) E2 蛋白,陽(yáng)性率可達(dá) 98%,結(jié)果變異系數(shù)<6%。
口蹄疫病毒空斑實(shí)驗(yàn):細(xì)胞單層接種 6 孔板,病毒 10 倍系列稀釋后吸附 1 小時(shí),覆蓋含 1% 瓊脂糖的維持液,48 小時(shí)后結(jié)晶紫染色計(jì)數(shù)空斑,空斑形成單位(PFU)檢測(cè)靈敏度達(dá) 10?.? PFU/mL。
優(yōu)勢(shì):
應(yīng)用普適性強(qiáng):對(duì)多種豬源病毒敏感,無(wú)需針對(duì)特定病毒進(jìn)行基因改造,適合基層實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)檢測(cè)與規(guī)?;a(chǎn),應(yīng)用范圍遠(yuǎn)超 PK-15-KO-MAP3K8 等特異性模型。
培養(yǎng)成本低廉:對(duì)血清質(zhì)量要求低,可使用低成本替代血清,傳代操作簡(jiǎn)單,培養(yǎng)成本僅為基因編輯細(xì)胞系的 1/3,尤其適合資源有限的機(jī)構(gòu)。
歷史數(shù)據(jù)豐富:累計(jì)應(yīng)用超 60 年,積累了海量病毒培養(yǎng)與檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)結(jié)果易與歷史數(shù)據(jù)比對(duì),是獸醫(yī)學(xué)研究的 “基準(zhǔn)細(xì)胞系"。
局限性:
功能研究深度不足:未經(jīng)過(guò)基因編輯改造,難以精準(zhǔn)解析單一基因或通路的功能,需與 PK-15-KO-MAP3K8 等細(xì)胞系配合開(kāi)展機(jī)制研究。
部分病毒敏感性低:對(duì)豬圓環(huán)病毒的分離率僅 30%(顯著低于 PK15-B1 細(xì)胞的 95%),需與其他細(xì)胞系聯(lián)合使用以覆蓋更多病毒類型。
懸浮培養(yǎng)適應(yīng)性差:貼壁依賴性強(qiáng),難以像 PK16-U 細(xì)胞那樣實(shí)現(xiàn)大規(guī)模懸浮培養(yǎng),疫苗生產(chǎn)的規(guī)?;潭仁芟?。
IBRS-2 細(xì)胞系的建立為豬源病毒研究與防控提供了基礎(chǔ)性工具,其在豬瘟、口蹄疫等重大疫病防控中的應(yīng)用,直接推動(dòng)了我國(guó)動(dòng)物疫苗產(chǎn)業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展。未來(lái),通過(guò)基因編輯技術(shù)增強(qiáng)其對(duì)低敏感性病毒(如豬圓環(huán)病毒)的識(shí)別能力,或改造為懸浮適應(yīng)株,可進(jìn)一步拓展其應(yīng)用范圍;結(jié)合微流控技術(shù)構(gòu)建 “芯片 - IBRS-2" 模型,有望提升病毒檢測(cè)的靈敏度與自動(dòng)化程度。作為經(jīng)典豬腎細(xì)胞系的代表,IBRS-2 與 PK-15-KO-MAP3K8 等基因編輯細(xì)胞系形成互補(bǔ),共同支撐豬源病毒學(xué)研究從基礎(chǔ)應(yīng)用到精準(zhǔn)機(jī)制的全鏈條需求。
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