NS1 表達與分泌：NS1 蛋白在細胞內呈胞質分布，同時可分泌至細胞外，培養液中 NS1 濃度達 2-3μg/mL（ELISA 檢測），顯著高于 WNV 感染的 Vero 細胞（＜0.5μg/mL）。分泌型 NS1 保留天然構象，可與抗 NS1 特異性抗體結合，免疫熒光檢測顯示 95% 以上的細胞呈 NS1 陽性，表達均一性高（變異系數＜7%）。

生物安全性：無致瘤性（裸鼠接種實驗陰性），外源病毒與支原體檢測均為陰性，未整合 WNV 其他病毒基因，避免了潛在的病毒傳播風險，符合人用診斷試劑生產的細胞基質要求。

病毒敏感性：保留對 WNV 的易感性，感染后病毒滴度達 10?-10? PFU/mL，與親本 Vero 細胞相當，可用于 WNV 復制與 NS1 功能的協同研究。

抗原制備：VERO/WNV-NS1 分泌的 NS1 蛋白可作為診斷抗原，用于 WNV 感染的血清學檢測。通過親和層析純化的重組 NS1 純度達 95% 以上，用其制備的 ELISA 試劑盒檢測 WNV 陽性血清的敏感性達 97%，特異性＞99%，較傳統病毒感染制備的抗原批間差異降低 60%，且避免了病毒培養的生物安全風險（無需 BSL-3 實驗室操作）。

快速診斷試紙條生產：以該細胞系來源的 NS1 為捕獲抗原，構建膠體金免疫層析試紙條，檢測時間僅需 15 分鐘，對 WNV 感染患者血清的檢出率達 94%，適合基層醫療機構與野外疫情監測使用。

疫苗免疫原性檢測：可用于 WNV 疫苗誘導的抗 NS1 抗體檢測。例如，對 WNV 滅活疫苗免疫的小鼠血清，通過 VERO/WNV-NS1 細胞的間接免疫熒光實驗，可定量分析抗 NS1 抗體效價，與中和抗體效價相關性達 0.85，為疫苗免疫效果評估提供補充指標（傳統疫苗評估主要依賴中和抗體檢測）。

NS1 亞單位疫苗研究：其分泌的 NS1 蛋白經純化后可作為亞單位疫苗候選抗原，免疫小鼠后誘導的抗 NS1 IgG 效價達 1:6400，可顯著降低 WNV 感染后的病毒載量（降低 100 倍以上），為開發無病毒顆粒的安全疫苗提供新思路。

中和抗體篩選：基于其穩定表達 NS1 的特性，可構建抗 NS1 抗體的高通量篩選模型。例如，通過噬菌體展示文庫篩選獲得的抗 NS1 單克隆抗體，在該細胞系中驗證顯示可抑制 NS1 的胞外分泌（抑制率達 80%），進而降低 WNV 的傳播效率（體外實驗中病毒擴散減少 60%）。

NS1 功能研究：利用該細胞系可解析 NS1 在 WNV 感染中的作用，如通過 CRISPR-Cas9 敲除內源性 NS1 表達后，發現 WNV 復制效率下降 50%，證實 NS1 對病毒復制的促進作用，為靶向 NS1 的抗病du藥物設計提供理論依據。

培養基：DMEM 高糖培養基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸，pH 維持在 7.2-7.4，可加入青mei素 - 鏈mei素混合液（100U/mL）預防污染。

傳代流程：當細胞融合度達 80%-90% 時，棄去舊培養基，PBS 洗滌 2 次，加入 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 溶液，37℃孵育 3-5 分鐘至細胞脫落，加入含血清的培養基終止消化，按 1:4 比例接種至新培養瓶，避免過度融合導致 NS1 表達下調。

凍存保護：取對數生長期細胞，用含 10% DMSO 的wan全培養基重懸至密度 1×10?個 /mL，分裝后經程序降溫盒 - 80℃過夜，轉移至液氮長期保存，復蘇時 37℃水浴快速解凍，離心去除 DMSO 后接種，傳代 2 次待細胞狀態穩定后用于實驗。

蛋白純化：收集培養 48 小時的細胞上清，經 0.22μm 濾膜過濾后，使用 Ni2?親和層析柱（NS1 含 6×His 標簽）純化，洗脫液經透析去除咪唑，BCA 法測定蛋白濃度，SDS-PAGE 驗證純度。

表達檢測：通過 Western blot 檢測 NS1（分子量約 48kDa），或 ELISA 定量分析培養液中 NS1 濃度，確保每批次抗原活性一致（批間差異＜10%）。

優勢：

局限性：