APN 表達與受體結合：膜表面 APN 表達量達 7.1×10?分子 / 細胞（野生型 MDCK 僅為 1.2×103，MDCK-HA 不表達），可特異性結合犬冠狀病毒 S 蛋白（結合率 95%），對豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）的交叉結合率約 40%；APN 介導的病毒內吞效率是野生型細胞的 12 倍，與 MDCK-HA 的 HA 介導內吞機制不同，其依賴 pH 中性條件下的受體構象激活。

冠狀病毒復制支持：對犬冠狀病毒的感染效率達 98%（野生型為 15%，MDCK-HA 無支持能力），病毒復制周期縮短至 12 小時（野生型為 24 小時），培養上清中病毒滴度達 10?.? TCID??/mL（是野生型的 100 倍）；感染后 48 小時出現典型的細胞脫落病變（MDCK-HA 感染流感病毒表現為融合病變），與犬冠狀病毒自然感染的細胞病理特征高度一致。

受體功能特異性：敲除 APN 后，冠狀病毒感染率從 98% 降至 8%，但對流感病毒的敏感性無顯著變化（與 MDCK-HA 的 HA 功能特異性形成呼應）；過表達 APN 可使其他犬源細胞（如 cf2Th）的冠狀病毒感染率提升 8 倍，證實其受體功能的核心性。

受體介導的內吞路徑：利用該細胞系發現，APN 與冠狀病毒 S 蛋白結合后，通過激活 PI3K/Akt 信號通路（磷酸化水平提升 4 倍）促進內吞體形成，與野生型細胞相比，內吞體成熟速度加快 50%；與 MDCK-HA 的酸性依賴融合機制不同，冠狀病毒通過 APN 介導的內吞體直接釋放核衣殼（pH 6.5-7.0 條件下效lü最高），明確冠狀病毒te有的入侵路徑。

S 蛋白 - 受體互作位點：通過表達突變型 APN 的 MDCK-C09 細胞發現，APN 第 294 位天冬氨酸是與 S 蛋白結合的關鍵位點（突變后結合率下降 90%），該位點在犬、豬等動物中高度保守（人與犬的同源性達 82%），為廣譜冠狀病毒受體阻斷劑設計提供靶點。

受體阻斷劑篩選模型：建立基于病毒入侵抑制的高通量篩選體系，某小分子化合物可特異性阻斷 APN 與 S 蛋白結合（IC??=1.8μM），在 MDCK-C09 細胞中使冠狀病毒復制下降 99%，對 MDCK-HA 支持的流感病毒無抑制作用（體現與 HA 靶向藥物的特異性差異），動物實驗顯示其可降低犬冠狀病毒感染后的病毒載量 10?倍。

中和抗體效能檢測：利用 APN 高表達特性，可靈敏評估抗冠狀病毒 S 蛋白抗體的中和活性，某單克隆抗體在該細胞系中表現出的中和效價是野生型細胞的 8 倍（EC??=0.03μM），與犬體免疫保護力的相關性達 97%（高于 MDCK-HA 對流感抗體的評估效率）。

疫苗株免疫原性評估：通過比較不同冠狀病毒疫苗株在 MDCK-C09 細胞中的復制能力與 S 蛋白表達量，發現弱毒株的 S 蛋白突變可導致 APN 結合力下降 30%，但誘導的中和抗體滴度更高（與 MDCK-HA 評估流感疫苗的 HA 活性指標形成對照），為疫苗株減毒機制研究提供依據。

跨種傳播風險評估：表達人源 ACE2 受體的 MDCK-C09 衍生株，可模擬冠狀病毒跨種感染的受體適應過程，發現某犬冠狀病毒變異株的 S 蛋白突變可使對人 ACE2 的結合力提升 5 倍，提示潛在跨種傳播風險（與 MDCK-HA 研究流感跨種機制的思路一致但對象不同）。

優勢：

局限性：