AGS細胞常見問題及處理策略

　　AGS細胞（人胃腺癌細胞）在培養過程中易出現貼壁性差、污染及異常增殖等問題，需針對性優化操作流程與環境控制，以保障細胞正常生長與實驗可靠性。

　　一、貼壁性差：優化培養條件與操作細節

　　培養基與血清適配性

　　確認使用含10%胎牛血清（FBS）的DMEM或RPMI-1640培養基，血清需經56℃滅活30分鐘以去除補體干擾。若細胞仍貼壁不佳，可嘗試添加0.1%ECM膠（如Matrigel）預涂培養瓶，增強細胞黏附。

　　避免頻繁更換血清品牌，防止因成分差異導致細胞適應不良。

　　傳代操作規范

　　消化時使用0.25%胰酶-EDTA，37℃孵育1-2分鐘，待細胞變圓后立即終止消化（加入2倍體積培養基），避免過度消化損傷細胞膜。

　　傳代密度控制在1:3至1:4，過低密度（如<1:6）易導致細胞接觸抑制失效，貼壁能力下降。

　　培養環境穩定

　　維持37℃、5%CO?、飽和濕度條件，避免溫度波動（如頻繁開關培養箱）或氣體濃度異常（如CO?濃度>6%）影響細胞代謝。

　　二、污染：嚴格無菌操作與早期干預

　　細菌/真菌污染

　　觀察培養基渾濁度、pH變化（黃色變紫）及細胞形態（如顆粒增多、崩解），若懷疑污染，立即丟棄細胞并底消毒超凈臺（75%酒精擦拭+紫外線照射30分鐘）。

　　培養基中添加1%雙抗（青霉素-鏈霉素）作為預防，但長期使用可能篩選耐藥菌，建議僅在污染高發期使用。

　　支原體污染

　　定期檢測（如PCR法或熒光染色法），若陽性則用5-10μg/mLBM-Cyclin處理2-3周，同時更換所有培養用品（包括培養基、血清、槍頭）。

　　三、異常增殖：控制傳代周期與密度

　　過密生長抑制

　　當細胞融合度達80%-90%時及時傳代，避免接觸抑制失效導致細胞堆疊、形態異常（如多核化）。

　　若細胞已堆疊，可用0.02%EDTA短暫處理（1-2分鐘）分散細胞團，再重新鋪板。

　　遺傳漂變干預

　　每10-15代凍存一支原始細胞株，避免長期培養導致基因型漂移（如增殖速度加快、藥物敏感性改變）。

　　若細胞出現自發轉化（如形成克隆島、接觸抑制消失），建議更換新復蘇的細胞株。